[发明专利]一种建兰的无菌播种和试管苗繁殖方法

说明书

技术领域：

本发明属于植物繁殖领域，具体涉及一种建兰的无菌播种和试管苗繁殖方法。

背景技术：

国兰是我国的传统铭花，观赏价值和经济价值极高，通常指兰科兰属植物中的一部分地生种，一般包括建兰（Cymbidium ensifolium）、春兰（C.goeringii）、蕙兰(C.faberi)、墨兰(C.sinense)、寒兰(C.kanran)、莲瓣兰(C.tortisepalum)、春剑7个种。国兰淡雅幽香，被誉为“花中君子”，备受文人雅客赏识，在我国已有两千多年的栽培历史，并形成独特的兰文化，国兰在东南亚国家也十分流行。

尽管国兰在我国流行千年，但它的开发和利用仍处于初级阶段，未能解决种苗大量繁殖的问题，产业化发展速度缓慢。国兰的优良品种量少价高，主要依赖从野生资源中筛选获得。由于经济利益的驱动，为了获得优良品种，人们上山大量挖掘野生资源筛选栽培，对野生资源造成了毁灭性的破坏。其次由于森林面积的大幅度减少，兰花生存环境的改变，对野生兰花的种群延续也形成严重威胁，目前，野生国兰已经难免踪迹。

国兰的繁殖目前主要靠分株繁殖，但分株繁殖速度慢，繁殖率低，周期长，且易伤害母株，还会遗带病毒，长期分株繁殖的种苗抗性变差。国兰的种子非常细小，一个蒴果中有成千上万的种子，但种子没有胚乳，种皮致密，在自然条件下发芽率极低，很难满足规模化生产的需求。

建兰开花期为5月至11月，每年两次开花，开花性状优良，备受市场欢迎，少量品种已经开始小批量的规模化生产和销售。但对于很多带叶艺和花艺的优良品种，由于种苗数量有限，无法做到产业化发展。无法满足市场对优良品种的需求。因此，有目的地选择性状优良的亲本，开展建兰品种间和种间的杂交育种，解决建兰种子的无菌播种、提高种子萌发率、提高根状茎增殖率、根状茎诱导芽、生根壮苗培养和试管苗移栽等无菌播种成苗的关键技术，从而选育具有叶艺和花艺及抗性强的优良新品种，这不仅能促进建兰产业化的可持续发展，还能进一步保护野生资源。该技术具有广阔的应用前景。

发明内容：

本发明的目的是提供一种能够大量繁殖种苗和筛选优良品种的建兰的无菌播种和试管苗繁殖方法。

本发明的建兰的无菌播种和试管苗繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

（a）人工授粉：选取生长健壮且带叶艺或花艺的建兰（Cymbidium ensifolium）为亲本，花开2～10天内进行人工授粉，授粉前后将整朵花套授粉袋，授粉后将亲本的唇瓣去掉；

（b）无菌播种和种子预处理：待杂交蒴果7-8分成熟且未开裂时采下，消毒处理，将消毒后的蒴果在无菌纸上纵切，将其粉末状的种子悬浮于无菌水中，超声清洗5～10min，然后将清洗后的种子悬浮液均匀滴播在种子萌发培养基培养，培养温度26±2℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12小时/天，种子在萌发培养基上萌发形成根状茎，所述的种子萌发培养基为：每升含有肌醇80-120mg、萘乙酸（NAA）0.5-2.0mg、椰子汁50-200ml、香蕉汁50-100g、活性炭1-2g、蔗糖15-20g、琼脂5-6g，其余为ZJ1培养基，pH 5.5～5.7；

（c）根状茎繁殖：将根状茎培养在增殖培养基上培养，培养温度26±2℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12小时/天，根状茎大量增殖，所述的增殖培养基为：每升含有肌醇80-120mg、萘乙酸（NAA）0.2-2.0mg、苄氨基腺嘌呤（BA）0.5-3.0mg、活性炭1-2.0g、香蕉50-150g、蔗糖10-20g、琼脂5-6g、其余为MS培养基，pH 5.5～5.7；

（d）根状茎分化芽：将步骤（c）得到的长1～2cm的根状茎培养在分化芽培养基上，培养温度26±2℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12小时/天，根状茎上分化出芽，所述的分化芽培养基为：每升含有肌醇80-120mg、萘乙酸（NAA）0.05-1.0mg、噻苯隆（TDZ）0.5-2mg、椰子汁50-150ml、蔗糖10-20g、琼脂5-6g，其余为ZJ2培养基，pH 5.5～5.7；