[发明专利]荧光微球标记克伦特罗单克隆抗体的方法无效
| 申请号： | 201310348210.5 | 申请日： | 2013-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN103675261A | 公开（公告）日： | 2014-03-26 |
| 发明（设计）人： | 赖卫华;彭涛 | 申请（专利权）人： | 南昌大学 |
| 主分类号： | G01N33/533 | 分类号： | G01N33/533 |
| 代理公司： | 南昌新天下专利商标代理有限公司 36115 | 代理人： | 施秀瑾 |
| 地址： | 330031 江西省*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 荧光 标记 克伦特罗 单克隆抗体 方法 | ||
1.荧光微球标记克伦特罗单克隆抗体的方法，其特征在于：(1)氨基修饰的荧光微球与活泼酯化的生物素在PBS溶液中偶联反应2 h得到荧光微球-生物素偶联物，再离心、洗涤除去未结合的生物素；(2)将链霉亲和素与荧光微球-生物素偶联物混合轻摇反应2 h后，离心、用PBS溶液洗涤移除未偶联的链霉亲和素，得到荧光微球-生物素-链霉亲和素偶联物；(3)将生物素化的克伦特罗单克隆抗体加入到荧光微球-生物素-链霉亲和素的偶联物溶液中轻摇反应1 h后，洗涤、离心以除去未偶联上的生物素化克伦特罗单克隆抗体，即得到荧光微球标记克伦特罗单克隆抗体即荧光微球-生物素-链霉亲和素-生物素化克伦特罗单克隆抗体；
所述活泼酯化的生物素为将生物素-PEG5000复合物溶于DMF溶液中，加入二环己基碳亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺后室温搅拌反应24 h，然后离心弃沉淀，得到活泼酯化的生物素；所述氨基修饰的荧光微球的制备方法：10 mg荧光微球洗净后超声溶解于1 mL蒸馏水中，加入20 μL冰乙酸和20 μL(3-三甲氧基硅丙基)-二乙基乙二胺超声溶解后，磁力搅拌3～4 h，用10 mM pH5.5的MES缓冲液洗涤并重悬；所述荧光微球粒径为175 nm。
2.根据权利要求1所述的荧光微球标记克伦特罗单克隆抗体的方法，其特征在于：所述生物素化克伦特罗单克隆抗体的的制备方法：用1 mL DMSO溶液溶解生物素N-羟基琥珀酰亚胺酯NHSB配制成浓度为1 mg/mL的溶液，取120 μL加入到1mL浓度为1.7 mg/mL克伦特罗单克隆抗体溶液中，在室温下持续搅拌，保温2~4 h；然后加入9.6 μL 1 mol/L的NH4Cl 溶液在室温下搅拌10 min，用PBS溶液在4℃下充分透析除去游离的生物素；将透析完后的样品上1 ml 的分子筛柱，以PBS溶液缓慢洗脱，抗体在1~3 ml 之间洗下，再在收集到的目标产物中加入叠氮钠及1.0 g/L的BSA溶液，在4 ℃下避光保存备用。
3.根据权利要求1所述的荧光微球标记克伦特罗单克隆抗体的方法，其特征在于：所述链霉亲和素与荧光微球-生物素偶联物混合反应的投料摩尔比为1000:1。
4.根据权利要求1所述的荧光微球标记克伦特罗单克隆抗体的方法，其特征在于：所述荧光微球标记生物素化克伦特罗单克隆抗体与荧光微球-生物素-链霉亲和素的偶联物的投料摩尔比为1:1000。
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