[发明专利]一种利用抗菌肽融合表达提高转基因植物抗病性的方法无效
| 申请号： | 201310350122.9 | 申请日： | 2013-08-13 |
| 公开（公告）号： | CN103710370A | 公开（公告）日： | 2014-04-09 |
| 发明（设计）人： | 刘仁虎;王伏林;郑滔;郎春秀;吴关庭;石江华;胡张华;金卫;陈锦清 | 申请（专利权）人： | 浙江省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/82;A01H5/00 |
| 代理公司： | 杭州杭诚专利事务所有限公司 33109 | 代理人： | 尉伟敏;郑汝珍 |
| 地址： | 310021 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 抗菌 融合 表达 提高 转基因 植物 抗病性 方法 | ||
1.一种利用抗菌肽融合表达提高转基因植物抗病性的方法，其特征在于： 1）采用AMP1-LP-AMP2-LP-AMP3……LP-AMPn的融合基因表达结构构建基因表达载体，其中AMP1至AMPn可以是不同抗菌肽，也可以是相同抗菌肽，n可以任意自然数，一般为3至10，LP为植物内肽酶识别和剪切序列；2）将构建的可剪切的抗菌肽融合表达载体转入作物中，使抗菌肽在转基因作物中高效表达，而后植物体内的内肽酶作用于内肽酶识别位点LP ，使融合抗菌肽剪切为单个有活性的抗菌肽单元。
2.根据权利要求1所述的一种利用抗菌肽融合表达提高转基因植物抗病性的方法，其特征在于：采用AMP1-LP-AMP2-LP-AMP3……LP-AMPn的融合基因表达结构构建基因表达载体包含如下步骤：1）设计成AMP1-LP-AMP2-LP-AMP3……LP-AMPn的融合基因表达结构；2）根据设计的融合抗菌肽编码序列合成基因；3）将合成的基因克隆获得抗菌肽基因融合表达载体；4）构建植物遗传转化载体；5）构建植物表达载体后利用该载体转化植物。
3.根据权利要求2所述的一种利用抗菌肽融合表达提高转基因植物抗病性的方法，其特征在于： AMP1-LP-AMP2-LP-AMP3……LP-AMPn的融合基因表达结构的形成包含以下步骤：1）将多种抗菌肽或多拷贝同种抗菌肽（AMP）通过基因融合表达的方法构建串联融合表达载体，同时在融合表达的不同抗菌肽单元间设计内肽酶剪切位点（LP）；2）根据植物密码子偏好设计融合抗菌肽的基因编码序列，将抗菌肽和剪切肽相互间隔排列，形成AMP1-LP-AMP2-LP-AMP3……LP-AMPn的融合基因表达结构，其中AMP1至AMPn可以是不同抗菌肽，也可以是相同抗菌肽，n可以任意自然数，一般为3至10。
4.根据权利要求2所述的一种利用抗菌肽融合表达提高转基因植物抗病性的方法，其特征在于：根据设计的融合抗菌肽编码序列合成基因是：按照AMP1-LP-AMP2-LP-AMP3……LP-AMPn融合表达的次序，密码子优化后合成基因。
5.根据权利要求2所述的一种利用抗菌肽融合表达提高转基因植物抗病性的方法，其特征在于：将合成的基因克隆获得抗菌肽基因融合表达载体：是将合成的基因克隆于pMD18-T载体，反复酶切和连接操作可获得任意拷贝数的抗菌肽基因融合表达载体。
6.根据权利要求2所述的一种利用抗菌肽融合表达提高转基因植物抗病性的方法，其特征在于：植物遗传转化载体的构建：是将克隆获得的多个抗菌肽基因融合表达载体中的外源基因插入片段用NcoⅠ+ XbaⅠ双酶切切下，连入pFGC5941相应酶切位点，构成植物遗传转化载体pFGC-n×AMPs，融合的抗菌肽基因数目n为任意自然数，一般为3至10，该载体采用2×35S启动子驱动外源基因表达。
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