[发明专利]一种二氢青蒿素高级脂肪酸酯及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种二氢青蒿素高级脂肪酸酯及其制备方法。 

背景技术

青蒿素(artemisinin)是从菊科植物黄花蒿Artemisiaannua L.中提取的新型抗疟药，具有高效、速效、低毒的特点，是中国唯一被世界卫生组织认可的按西药研究标准研究开发的植物药，也是第一个真正得到全球公认的中药产品。青蒿素由于存在近期复燃性高，在油中和水中的溶解度低，难以制成合适的剂型等不足，对其结构进行改造，寻找合适的青蒿素衍生物工作成为当今研究的热点。目前，已发现不少抗疟活性更高的衍生物，这些化合物主要是对青蒿素的10位碳原子进行修饰。 

青蒿素                   二氢青蒿素 

1、青蒿素的结构修饰 

在构效关系的指导下，结合实验结果，研究表明在保留过氧桥这个活性中心的前提下，主要对青蒿素的10位碳原子进行不同类别反应的修饰，将亲脂性、亲水性基团引入青蒿素结构中，以增加其油溶性、水溶性；或者将具有生理活性的大分子，如甾体等引入青蒿素结构中，以增强其稳定性等等。截止目前已经有成百上千种的青蒿素衍生物合成，但是成功应用于临床的并不多。修饰方式主要采用下列方法： 

①醚类青蒿素衍生物。 

李英等报道以二氢青蒿素为中间体，在酸和碱的催化下形成脂溶性的蒿甲醚、蒿乙醚。其中蒿甲醚经临床研究证实不仅保持了青蒿素的特点，而且能使复发率有所降低，加上它油溶性很大，可以制成针剂，对抢救危重疟疾病人非常有利。 

②碳酸酯、羧酸酯类青蒿素衍生物。 

李英等首先将青蒿素(A)催化氢化形成二氢青蒿素(B),以此为中间体,在酸和碱的催化下与各种醇、羧酸酐和氯甲酸酯反应,合成其醚类(C)、碳酸酯类(D)和羧酸酯(E)等衍生物47个，如下所示。 

③芳胺类青蒿素衍生物。 

1990年，Keasling等由脱水二氢青蒿素经溴加成，最后与相应的芳胺缩合，合成一系列芳胺类青蒿素衍生物，活性实验发现该类化合物具有很高的抗疟活性。 

2、脂肪酶催化修饰天然产物 

Nakajima等用酶催化合成了一系列本身存在于植物中的黄酮苷酯化物。例如，在脂肪酶CAL-B或Amano-PS催化下，槲皮苷和肉桂酸乙烯酯发生酯交换反应，葡糖基的6″羟基被酯化，生成肉桂酸异槲皮苷酯。相似的可以合成香豆酸、咖啡酸和阿魏酸异槲皮苷酯。Nakajima等称用酶催化酯交换反应合成天然黄酮苷酯化物转化率低，是由于作为酰基供体的芳香酯分子中的酚羟基间发生了氧化缩聚，影响酯化的进行。他们用由甘薯细胞培养的酶(未分离)，以三磷酸腺苷作能源提供物，和辅酶CoA共同作用，用咖啡酸、肉桂酸等芳香酸直接酯化异槲皮苷,生成一 系列异槲皮苷酯。Danieli等将酶催化和化学水解结合，合成出相同的天然存在的黄酮苷酯化物，后来改变酰基供体，开辟出另一种“酶催化酯化-化学水解”的合成方法。 

Gayot等用Novozyme435催化棕榈酸直接酯化柚皮苷，柚皮苷只有葡糖基的6″羟基被酯化，引入了长链。由于脂肪酶催化酯化反应在非水介质中进行，反应介质中的水使反应效率变低,影响酶的选择性。Gayot还研究了反应中可能引入的水(如柚皮苷、棕榈酸、反应介质叔戊醇带的水分，酯化生成的水)对酯化的影响，发现柚皮苷和叔戊醇的水分对反应产率影响很大，需事先干燥。Kontogianni等用Novozyme435催化不同链长(C8、C10、C12)的脂肪酸酯化柚皮苷和芦丁，筛选了反应介质，针对癸酸酯化柚皮苷考察了反应中水活度对产率的影响，并研究了不同投料浓度下的反应动力学。 

3、Novozyme435脂肪酶 

脂肪酶Novozyme435是一种由（B脂肪酶）Candida antarctic得到的脂肪酶；用一种经过基因改性的米曲霉微生物进行深层发酵并吸收在一种大孔性树脂上而制成。Novozyme435对于酯类合成的活力可用每1克酶生成的月桂酸丙酯单位（PLU/g）来表示，约10,000PLU/g。 

Novozyme435是一种热稳定脂肪酶的固定化制剂。它特别适用于酯类和胺类化合物的合成。它具有宽广的底物专用性，可以促进范围很广的伯醇和仲醇与羧酸之间的反应。Novozyme435是一种耐热性很高的产品，在70－80℃范围内有最高的活力。由于在提高的温度下反应会引起酶的受热失活，为了保持优化的生产率，推荐在40－60℃范围内操作。 

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