[发明专利]一种乌饭树组织培养的方法有效
申请号: | 201310353850.5 | 申请日: | 2013-08-14 |
公开(公告)号: | CN103404440A | 公开(公告)日: | 2013-11-27 |
发明(设计)人: | 李峰;邓艳;高秋荣;田力;许超 | 申请(专利权)人: | 江苏九久环境科技有限公司 |
主分类号: | A01H4/00 | 分类号: | A01H4/00 |
代理公司: | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人: | 巩克栋 |
地址: | 214135 江苏省无锡市国家高新*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 乌饭树 组织培养 方法 | ||
1.一种乌饭树组织培养的方法,其特征在于,包括(1)外植体消毒、(2)诱导培养、(3)增殖培养、(4)生根培养四个步骤。
2.根据权利要求1所述的乌饭树组织培养的方法,其特征在于,所述步骤(1)的具体步骤为:
①取乌饭树当年生带腋芽的枝条并除去叶片后作为外植体,在洗涤液中浸泡;
优选地,所述洗涤液为浓度为0.5wt%~2wt%的洗衣粉的水溶液,优选1wt%的洗衣粉的水溶液;
优选地,所述浸泡的时间为5~30min,优选10~20min,更优选15min;
②刷洗后于流水下冲洗;
优选地,所述冲洗的时间为1~5h,优选2~4h,更优选3h;
③在超净工作台上,先放入酒精中浸泡,再用无菌水冲洗;
优选地,所述酒精是70wt%的酒精;
优选地,所述酒精中浸泡的时间为20~80s,优选30~60s,更优选40~50s;
优选地,所述无菌水冲洗的次数为2~8次,优选2-6次,更优选3~5次;
④升汞消毒后再用无菌水冲洗;
优选地,所述升汞是0.1wt%的升汞;
优选地,所述升汞消毒的时间是5~20min,优选10~15min;
优选地,所述无菌水冲洗的次数是2~10次,优选4~8次,更优选5~7次;
⑤吸干表面水分,将茎段剪成带l个腋芽的茎段;
优选地,所述茎段的长度是1~2cm。
3.根据权利要求1或2所述的乌饭树组织培养的方法,其特征在于,所述步骤(2)的具体步骤为:
将步骤(1)处理过的茎段接种到诱导培养基中进行诱导培养,待新梢长出,进行下一步骤;
优选地,所述诱导培养基是添加了玉米素、吲哚丁酸和赤霉素的WPM培养基;
优选地,所述诱导培养基所添加的激素浓度配比为玉米素0.05~4.0mg/L、优选0.1~3.0mg/L、更优选1.0~2.0mg/L,吲哚丁酸0.01~2.0mg/L、优选0.05~1.0mg/L、更优选0.1~0.4mg/L,赤霉素0.01~2.0mg/L、优选0.05~1.0mg/L、更优选0.1~0.2mg/L;
优选地,所述诱导培养的条件为于温度22~28℃、光照强度1000~2500Lux、光照周期12~16h/d的条件下培养30~45d,更优选于温度25℃、光照强度2000Lux、光照周期12~16h/d的条件下培养30~40d。
4.根据权利要求1-3任一项所述的乌饭树组织培养的方法,其特征在于,所述步骤(3)的具体步骤为:
将步骤(2)中得到的新梢剪下转移到增殖培养基中进行增殖培养,待新梢长至4~5cm时,进行下一步骤;
优选地,所述增殖培养基是添加了玉米素、吲哚乙酸和赤霉素的WPM培养基;
优选地,所述增殖培养基所添加的激素浓度配比为玉米素0.05~4.0mg/L、优选0.1~3.0mg/L、更优选1.0~2.0mg/L,吲哚乙酸0.01~2.0mg/L、优选0.1~1.0mg/L、更优选0.2~0.5mg/L,赤霉素0.05~4.0mg/L、优选0.1~2.0mg/L、更优选0.5~1.5mg/L;
优选地,所述增殖培养的条件为于温度22~28℃、光照强度1000~2500Lux、光照周期12~16h/d的条件下培养40~60d,更优选于温度25℃、光照强度2000Lux、光照周期12~16h/d的条件下培养45~55d。
5.根据权利要求1-4任一项所述的乌饭树组织培养的方法,其特征在于,所述步骤(4)的具体步骤为:
将步骤(3)中得到的长至4~5cm的新梢转移到生根培养基中进行生根培养,得到主根长3~4cm的生根苗;
优选地,所述生根培养基是添加了吲哚丁酸和萘乙酸的1/2WPM培养基;
优选地,所述生根培养基所添加的激素浓度配比为吲哚丁酸0.01~2.0mg/L、优选0.02~1.0mg/L、更优选0.03~0.06mg/L,萘乙酸0.01~3.0mg/L、优选0.05~2.0mg/L、更优选0.1~0.8mg/L;
优选地,所述生根培养的条件为于温度22~28℃、光照强度1000~2500Lux、光照周期12~16h/d的条件下培养15~35d,更优选于温度25℃、光照强度2000Lux、光照周期12~16h/d的条件下培养15~35d。
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