[发明专利]一种乌饭树组织培养的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物栽培领域，涉及植物组织培养，尤其涉及一种乌饭树组织培养的方法。

背景技术

乌饭树又名南烛，属杜鹃花科常绿灌木。多分布于我国南方地区，因人们有每年阴历三月初三和四月初八用其叶蒸乌饭食用而得名。乌饭树树形苍古遒劲，根干灰褐色带红，姿态优美，古拙典雅，是不可多得的制作盆景的优良素材；用乌饭树树叶制作的乌米饭具有补益脾肾，止咳、安神、明目、乌发的功效。因人们每年采食乌饭树树叶，外加开荒毁坏山体，导致乌饭树野生资源濒临灭绝。张法良报道了乌饭树种子萌发的方法，使其播种繁殖成为可能。但是，由于野生乌饭树所结果实较少，且较难采摘，故通过播种繁殖也较难实现大规模的发展。

植物的组织培养是根据植物细胞具有“全能性”的理论，于近年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。狭义则是指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。植物的组织培养具有：（1）占用空间小、不受地区、季节限制；（2）培养周期短、可短时间大量繁殖；（3）不存在变异、可保持原母本的一切遗传特征；（4）培养脱毒作物；（5）投资少，经济效益高等众多优点，正逐渐成为多种植物培育的新方式。但是作为食用及盆景的乌饭树，目前尚未见有关用植物的组织培养方法进行培育报道。

发明内容

本发明的目的在于针对乌饭树繁殖困难的难题，提供一种扩繁率高、生长速率快的乌饭树组织培养的方法。

为实现本发明的目的，本发明采用以下技术方案：

一种乌饭树组织培养的方法，包括（1）外植体消毒、（2）诱导培养、（3）增殖培养、（4）生根培养四个步骤。

所述步骤（1）的具体步骤为：

①取乌饭树当年生带腋芽的枝条并除去叶片后作为外植体，在洗涤液中浸

泡；

优选地，所述洗涤液为浓度为0.5wt%～2wt%（例如0.6wt%、0.8wt%、1.2wt%、1.5wt%或1.9wt%）的洗衣粉的水溶液，优选1wt%的洗衣粉的水溶液；

优选地，所述浸泡的时间为5～30min（例如6min、9min、12min、16min、22min或28min），优选10～20min，更优选15min；

②刷洗后于流水下冲洗；

优选地，所述冲洗的时间为1～5h（例如1.5h、2.1h、3h、4.5h或4.9h），优选2～4h，更优选3h；

③在超净工作台上，先放入酒精中浸泡，再用无菌水冲洗；

优选地，所述酒精是70wt%的酒精；

优选地，所述酒精中浸泡的时间为20～80s（例如25s、35s、45s、55s、65s或70s），优选30～60s，更优选40～50s；

优选地，所述无菌水冲洗的次数为2～8次（例如3次、4次、5次、6次、7次或8次），优选2-6次，更优选3～5次；

④升汞消毒后再用无菌水冲洗；

优选地，所述升汞是0.1wt%的升汞；

优选地，所述升汞消毒的时间是5～20min（例如6min、9min、11min、13min、15min、17min或19min），优选10～15min；

优选地，所述无菌水冲洗的次数是2～10次（例如2次、3次、5次、7次、8次或9次）），优选4～8次，更优选5～7次；

⑤吸干表面水分，将茎段剪成带l个腋芽的茎段；

优选地，所述茎段的长度是1～2cm。

所述步骤（2）的具体步骤为：

将步骤（1）处理过的茎段接种到诱导培养基中进行诱导培养，待新梢长出，进行下一步骤。

优选地，所述诱导培养基是添加了玉米素（ZT）、吲哚丁酸（IBA）和赤霉素（GA₃）的WPM培养基。

所述玉米素为一种天然的细胞分裂素，添加到培养基中能够将氨基酸、生长素、无机盐等营养成分向处理部位调运，具有抑制植物叶绿素、核酸、蛋白质的分解，保绿防老的功能。

所述吲哚丁酸为一种植物主根的生长促进剂，能够促进细胞分裂与细胞生长，主要是加速根的生长，提高生根的百分率、发芽率以及成活率。

所述赤霉素为一种植物激素，可刺激叶和芽的生长及茎间的伸长。