[发明专利]一种酶促制备(S)-3-羟基-4-氯丁酸乙酯的方法

权利要求书

1.一种酶促制备(S)-3-羟基-4-氯丁酸乙酯的方法，其以4-氯乙酰乙酸乙酯为底物，使该底物在酮还原酶的存在下发生不对称还原反应生成(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯，其特征在于：所述的酮还原酶为胞内酶，且为整细胞酶，且使所述反应在pH6.5～7.5的水相缓冲液中以及温度35～38℃下进行，其中不使用辅酶因子、不添加有机溶剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的水相缓冲液为磷酸钾缓冲液、乙酸钠缓冲液或Tris-HCl缓冲液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：使所述反应在一价或二价金属离子存在下进行。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述的金属离子为Li⁺、Na⁺、Mg²⁺、Ca²⁺、Cu²⁺Zn²⁺、Mn²⁺中的一种或多种的组合。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述的金属离子以其盐酸盐或硫酸盐的形式引入到反应的体系中。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述的金属离子与底物的摩尔比为0.01～0.03:1。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的酮还原酶为酶活在60U/ml～70U/ml之间的Cell KRED-022酶液。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的反应实施如下：向反应釜中加入水相缓冲液，打开搅拌并开始加热，待反应釜中温度稳定在35～38℃后，将所述底物一次性加入到反应釜中，再加入所述酮还原酶，进行反应，HPLC跟踪反应进程，至底物转化完全后，反应停止，直接用乙酸乙酯分三次萃取，合并乙酸乙酯，饱和食盐水洗涤，分出乙酸乙酯，干燥浓缩即得(S)-3-羟基-4-氯丁酸乙酯。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：在加入所述底物前，还向体系中加入一价或二价金属离子的盐酸盐或硫酸盐。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述金属离子为Li⁺、Na⁺、Mg²⁺、Ca²⁺、Cu²⁺Zn²⁺或Mn²⁺。