[发明专利]一种人血白蛋白的制备工艺

说明书

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，涉及蛋白质药物的分离及纯化工艺，特别是涉及一种人血白蛋白的制备工艺。

背景技术

人血白蛋白是血液制剂的主要产品，也是血浆蛋白生产工艺主干的最终产物。白蛋白在肝细胞合成速度极快，具有分子相对小(分子量66250)、表面积相对较大，分子构形比较对称，结构简单、牢固、富韧性等特点。白蛋白对失血性休克，严重烧伤，脑水肿，肝肾疾病的血症有重要作用。自从Cohn等人于40年代创立低温乙醇人血浆蛋白分离技术以来，血浆蛋白的工业化大生产取得了长足的进展。

目前采用低温乙醇分离法生产人血白蛋白的厂家，多数存在白蛋白得率低，产品稳定性差，纯度低，其他部分指标容易不达标，如PKA含量，铝残留量，多聚体含量等。出现以上不足的主要原因还是制备工艺的不合理。目前大多数制备工艺中分离组分多采用离心分离法，而组分在高速离心过程中，因离心机的升温作用容易造成部分应沉淀的杂蛋白溶解而无法除去，留下了不稳定因素。二者高速的离心过程，产生强大的离心剪切力，易破坏蛋白质的分子结构，势必降低白蛋白的得率，影响制品的纯度。

现有低温乙醇分离法中因原料血浆保存不当，白蛋白制备过程中反复溶解和制备组分沉淀引起部分蛋白变性，皆会引起激肽释放酶原激活剂（PKA）升高。当人体输注PKA含量超标的人血白蛋白时，将引起血管舒张、毛细血管通透性增加、血压下降等不良反应。

现有白蛋白制备工艺中，皆有超滤技术的应用，但主要使用单一溶液进行透析，仅能很好地将乙醇残留量控制在要求范围内，而不能有效将铝残留量降到最低，以确保制品在有效期内铝残留量不超标。铝可能具有引发低血色素性贫血、老年痴呆症、骨软化病和慢性肾功能损害等危险性。2010年版中国药典收入了人血白蛋白制品铝残留量的要求，质量标准与欧洲药典一致（≤200μg/L）。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种人血白蛋白的制备工艺，能提高白蛋白的得率和稳定性，保证产品的质量。

为解决现有技术中的问题，本发明主要从以下几个方面入手：

1、采用压滤技术替代传统的离心技术进行固液分离，控制进液压力最高不超过0.20Mpa。

2、采用Zetaplus深层滤芯过滤结合延长巴氏灭活时间，降低人血白蛋白制品中的激肽释放酶原激活剂（PKA）含量。

3、采用超滤技术，分别使用2种梯度浓度的氯化钠溶液超滤，提高制品质量。

本发明所采用的技术方案是：一种人血白蛋白的制备工艺，采用低温乙醇分离法，以人血浆为原料，分别进行血浆溶解；组分I制作；组分II+III制作；组分IV制作；组分V制作；组分V精制；超滤；稀配；巴氏灭活；蛋白除菌分装；制品孵育；成品包装；其特征在于： 所述组分II+III制作、组分IV制作、组分V制作和组分V精制中采用压滤技术替代传统的离心技术进行固液分离，控制进液压力最高不超过0.20Mpa；白蛋白收率>29g/L血浆，纯度>98%。 

所述组分V精制中采用Zetaplus深层滤芯过滤，提高对内毒素和病毒的脱除能力，吸附制品中带负电的凝血因子XIIa，降低人血白蛋白制品中的激肽释放酶原激活剂（PKA）含量。

所述超滤中采用超滤技术将组分V纯化液浓缩至蛋白含量为15%以上，通过使用2种梯度浓度的氯化钠溶液超滤，控制制品中的乙醇残留量≤0.025%，铝残留量<50μg/L。

所述巴氏灭活中巴氏灭活的时间为12个小时，将制品中的PKA含量降到<20IU/ml。

优选：

所述组分II+III制作：取组分I 上清液，加pH4.0缓冲液调节组分I上清液的pH值为6.80—6.85，控制流速不超过1.0升/分钟；添加低于－15℃的95％乙醇至乙醇体积比浓度为20％，流速为1.0—1.2升/分钟，温度控制在－4—－6℃；加完乙醇后，pH为6.80—7.00；搅拌120分钟以上后，静置60分钟以上，再开启搅拌，按每升反应液加入17—19g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa，压滤后得组分Ⅱ+Ⅲ沉淀和组分Ⅱ+Ⅲ上清液；组分Ⅱ+Ⅲ沉淀用于制备免疫球蛋白，组分Ⅱ+Ⅲ上清液进入下一步工序。