[发明专利]寡克隆肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的培养和应用

权利要求书

1.一种肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的培养方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)从肝癌离体组织样本中，获取肿瘤与正常组织交界位置内外2mm范围的组织；

(2)培养步骤(1)的组织，培养基中加入IL-2，促进淋巴细胞生长、渗出和增殖，获得肝癌肿瘤浸润淋巴细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，IL-2在培养基中的终浓度为6000±1000IU/ml。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的培养基是RPMI 1640培养基，其中还含有：25±5mmol/L HEPES、100±20U/ml青霉素、100±20U/ml链霉素、2±0.4mmol/L谷氨酰胺、(5.5±1)×10^-5mol/L β-巯基乙醇、10±2%人AB血清。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，将步骤(1)的组织置于24孔板于增湿的37℃、5%CO₂环境中培养。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在培养过程中，每周更换一半培养基。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的含有肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的培养物中，Treg细胞所占比例低于10%。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的含有肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的培养物中，IFN-γ浓度高于280pg/mL。

8.权利要求1-7任一所述的方法制备的含有肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的培养物。

9.权利要求8所述的含有肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的培养物的用途，用于制备免疫过继治疗肝癌的药物。

10.一种用于制备含有肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的培养物的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括：

IL-2；和RPMI 1640培养基，其中还含有：25±5mmol/L HEPES、100±20U/ml青霉素、100±20U/ml链霉素、2±0.4mmol/L谷氨酰胺、(5.5±1)×10^-5mol/Lβ-巯基乙醇、10±2%人AB血清。