[发明专利]单核细胞移动抑制因子的固相合成方法

权利要求书

1.单核细胞移动抑制因子的固相合成方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

A）在活化剂系统的存在下，由树脂固相载体和N端Fmoc保护的丝氨酸叔丁酯Fmoc-Ser(tBu)偶联得到Fmoc-Ser(tBu)-树脂；

B）通过固相合成法，按照五肽Met-Gln-Cys-Asn-Ser主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且具侧链保护的氨基酸，其中天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺为侧链Trt保护；

C）脱除氨基酸侧链保护基；

D）裂解，脱除保护基和树脂得到五肽Met-Gln-Cys-Asn-Ser粗品；

F）纯化，冻干，得到五肽Met-Gln-Cys-Asn-Ser精制品。

2.如权利要求1所述的单核细胞移动抑制因子的固相合成方法，其特征在于所述活化剂系统由DCC、HOBT和DMAP组成。

3.如权利要求1所述的单核细胞移动抑制因子的固相合成方法，其特征在于所述树脂固相载体为2-Cl-Trt树脂或王树脂。

4.如权利要求1-3中任一项所述的单核细胞移动抑制因子的固相合成方法，其特征在于所述步骤B）包括如下步骤：

B1)采用DBLK所使述Fmoc-Ser(tBu)-2-Cl-Trt树脂脱除Fmoc保护基，得到Ser(tBu)-2-Cl-Trt树脂，所述DBLK由体积比为1:4-5的哌啶和DMF组成；

B2）在偶联剂系统的存在下，Ser(tBu)-2-Cl-Trt树脂和Fmoc保护且侧链Trt保护的天冬酰胺偶联得到Fmoc-Asn-Ser(tBu)-树脂；

B3）重复步骤B1、B2，按照五肽Met-Gln-Cys-Asn-Ser主链肽序依次进行氨基酸的偶联。

5.如权利要求4所述的单核细胞移动抑制因子的固相合成方法，其特征在于所述偶联剂系统包括缩合剂和反应溶剂，所述缩合剂选自DIC/HOBt、DCC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOAt/DIEA；所述反应溶剂选自DMF、DCM、NMP、DMSO中的一种或几种。

6.如权利要求1-3中任一项所述的单核细胞移动抑制因子的固相合成方法，其特征在于直接购买得到Fmoc-Ser(tBu)-树脂，从而省略步骤A），所述Fmoc-Ser(tBu)-树脂为取代值为0.4～1.0mmolNH/g的Fmoc-Ser(tBu)-2-Cl-Trt树脂或取代值为0.2～0.9mmolNH/g的Fmoc-Ser(tBu)-王树脂。

7.如权利要求1所述的单核细胞移动抑制因子的固相合成方法，其特征在于：所述步骤F)中，纯化为反相色谱纯化，色谱柱为反相C₁₈柱，柱温为30～40℃。