[发明专利]一种海洋生物脂肪酶的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种海洋生物脂肪酶的制备方法，属于微生物技术领域。

背景技术

脂肪酶是一类具有多种催化能力的酶，可以催化三酰甘油酯及其他一些水不溶性酯类的水解、醇解、酯化、转酯化及酯类的逆向合成反应，反应不需要辅酶反应条件温和，副产物少。除此之外还表现出其他一些酶的活性，如磷脂酶、溶血磷脂酶、胆固醇酯酶、酰肽水解酶活性等。脂肪酶不同活性的发挥依赖于反应体系的特点，如在油水界面促进酯水解，而在有机相中可以酶促合成和酯交换。自20世纪80年代后期，界面酶学和非水酶学的研究与应用取得了突破性的进展，极大地促进了脂肪酶多功能催化作用的开发，如乳制品的增香、鱼片脱脂、食用油加工、洗涤剂添加酶、皮革毛皮绢纺脱脂、制药、化工合成、污水处理、工具酶等多种用途。而且，在有机相中，脂肪酶还能催化酯合成、酯交换反应、酯聚合反应、肽合成以及酰胺合成等，是生产医药、化工、食品和化妆品的重要原料。当前，脂肪酶被广泛应用于工业生产中。

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种海洋生物脂肪酶的制备方法，该菌株具有发酵周期短，可有效降低成本及染菌几率。

为达到以上目的，本发明采取的技术方案是：

一种海洋生物脂肪酶的制备方法，具体步骤如下：

A、低温碱性脂肪酶的适冷性海洋酵母菌种的选取：

从黄海海泥中筛选到的一株能够分泌低温碱性脂肪酶的适冷性海洋酵母菌株；

B、将上述低温碱性脂肪酶的适冷性海洋酵母菌种接种于种子培养基中，200rpm培养20h，再接种于灭菌的发酵培养基中，接种量5％-8％，发酵温度28℃-30℃；

所述的发酵培养基包含：酵母粉5％、鱼蛋白胨1％、0.5％的橄榄油、0.2％磷酸二氢钾、磷酸氢二钾0.1％、0.05％硫酸镁，用25％氨水调节至PH5-6；

C、发酵培养基中使用橄榄油，待橄榄油耗尽，补加0.5％的橄榄油；

D、待橄榄油耗尽，流加12ml/L的甲醇，控制培养温度为25℃，流加量1-6h为lml/L.h，6h后增加至2ml/L.h，25％工业氨水调节pH6，诱导培养80h；

上述工艺中保持：通气量1∶0.8-1∶1.6；罐压1kg/平方厘米；补料生长液15ml/L的橄榄油；诱导液12ml/L的甲醇；搅拌转速不低于200rpm/min；发酵时间：96h。

本发明采用以上技术方案，与现有技术相比具有以下优点：

该菌株具有发酵周期短，只有96小时，一般发酵周期为130小时，可有效降低成本及染菌几率；表达能力强，从原来的10000U/ml提高到12000U/ml。该海洋生物脂肪酶在低温活力高，在碱性条件下性能稳定，其应用效果明显，同样用量是普通脂肪酶的1.3倍的效果。该产品在食品、医药、日化、饲料、造纸和环保等催化领域有着广阔的应用前景。

该海洋生物脂肪酶的投产，将是脂肪酶行业技术的重大改进，为当地区域经济发展起到积极的带动作用。

具体实施方式：

实施例

一种海洋生物脂肪酶的制备方法，具体步骤如下：

A、低温碱性脂肪酶的适冷性海洋酵母菌种的选取：

从黄海海泥中筛选到的一株能够分泌低温碱性脂肪酶的适冷性海洋酵母菌株；

B、将上述低温碱性脂肪酶的适冷性海洋酵母菌种接种于种子培养基中，200rpm培养20h，再接种于灭菌的发酵培养基中，接种量5％--8％，发酵温度28℃-30℃；

所述的发酵培养基包含：酵母粉5％、鱼蛋白胨1％、0.5％的橄榄油、0.2％磷酸二氢钾、磷酸氢二钾0.1％、0.05％硫酸镁，用25％氨水调节至PH5-6；

C、发酵培养基中使用橄榄油，待橄榄油耗尽，补加0.5％的橄榄油；

D、待橄榄油耗尽，流加12ml/L的甲醇，控制培养温度为25℃，流加量1-6h为1ml/L.h，6h后增加至2ml/L.h，25％工业氨水调节pH6，诱导培养80h；

上述工艺中保持：通气量1∶0.8-1∶1.6；罐压1kg/平方厘米；补料生长液15ml/L的橄榄油；诱导液12ml/L的甲醇；搅拌转速不低于200rpm/min；发酵时间：96h。