[发明专利]核酸和检测转基因水稻EB7001S及其衍生系的方法以及试剂盒及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及农业生物技术领域，具体地，涉及一种核酸、一种检测转基因水稻的方法、一种试剂盒以及该试剂盒在检测转基因水稻中的应用。

背景技术

水稻（Oryza sativa L.）作为世界上最重要的粮食作物之一，人们对其遗传转化和育种利用等方面进行了深入细致的研究。我国在水稻转基因研究领域取得了一系列重大成果，很多转基因水稻品种已被获准进行环境释放和生产性试验，2009年转Bt基因抗螟虫水稻“华恢1号”和“Bt汕优63”获得生产应用安全证书，标志着我国转基因水稻具备了商业化生产的基本条件。为了平衡贸易利益、满足公众关切、控制潜在风险、加强工商监管，许多国家相继建立了转基因生物及其产品的安全评价和标识制度。我国现行对于农业转基因生物的管理依据的是国务院2001年5月23日颁布的《农业转基因生物安全管理条例》，以及农业部2002年1月5日发布的《农业转基因生物安全评价管理办法》、《农业转基因生物进口安全管理办法》和《农业转基因生物标识管理办法》3个配套规章。为了实现对转基因生物及其产品的标识管理，保障转基因产品的有效监管和转基因产业的健康发展，对转基因检测技术的准确度和灵敏度提出了严格要求。

国际农业生物技术应用服务组织（International Service for the Acquisition of Agri-biotech Applications,ISAAA）统计报告显示，2012年全球28个国家种植转基因作物，种植面积达到1.703亿公顷，比2011年的1.6亿公顷增长了6%。水稻是世界上最重要的粮食作物之一，自第1批转基因水稻植株1988年问世以来，含有各种优良性状，如抗虫、抗除草剂、抗菌、抗病毒或营养改良的转基因水稻相继研发成功。但各国对转基因水稻的商业化生产态度谨慎，1999年美国批准了2个抗除草剂转基因水稻品种LL62和LL06的商业化种植，2004年伊朗开始规模化种植抗虫转基因水稻，2009年中国农业部批准了华中农业大学的转Bt基因抗虫水稻华恢1号和Bt汕优63的生产应用安全证书，但至今还没有获得品种审定，即商业化生产许可。

转基因植物中外源基因在染色体上插入位置的旁侧序列是转基因植物品系最重要的分子特征之一，是区别不同转化事件的唯一性标识，是建立转基因植物品系特异性检测方法的重要技术资料。如：王恒波等（转基因大豆GTS40-3-2转化事件特异性PCR检测[J].基因组学与应用生物学,2010,(06):1177-83）建立了抗草甘膦转基因大豆GTS40-3-2的品系特异性PCR检测方法。翟志芳等（转基因玉米LY038转化事件的特异性检测[J].农业生物技术学报,2011,(03):577-82.）采用修饰接头连接PCR获得了转基因玉米LY038的外源基因与玉米基因组之间的5'端侧翼序列，据此建立了转基因玉米LY038转化事件特异性定性检测方法。就水稻而言，目前国内获得了转基因水稻克螟稻（转Xa21基因水稻抗优97特异性检测方法的建立;中国植物病理学会2006年学术年会,中国湖南长沙,F,2006[C]）、Bt汕优63（CN101824411A）、科丰6号（转基因水稻Bt汕优63外源插入结构验证和定量检测方法建立[D];中国农业科学院,2008）、两系早稻恢复系B2A68（201310068126.8：核酸和检测转基因水稻B2A68及其衍生系的方法以及试剂盒及其用途）等的外源插入片段的旁侧序列，并建立了品系特异性的检测方法。

利用密码子优化的Epsps^#基因和Bar基因共同转化水稻，可以获得抗两种除草剂的水稻（参考专利申请201110270905.7，CN102994526A）。既抗除草剂草甘膦，又抗除草剂草铵膦的转基因水稻不育系不仅能方便除草，而且有利于实现机械化制种，还可以实现除草剂的交替使用、有效降低由于长期使用一种除草剂而导致杂草产生抗性的风险。本发明的发明人通过密码子优化的Epsps^#基因和Bar基因转化水稻，获得了一个转基因水稻新品系EB7001S。由于农杆菌转化水稻外源基因的插入具有随机性，转基因水稻品系EB7001S的外源基因在基因组中插入位置并不清楚，因此，难以实现对转基因水稻品系EB7001S的特异性检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种核酸及检测含有该核酸的转基因水稻品系的方法。