[发明专利]银杏内酯的提取和精制方法

权利要求书

1.银杏内酯的提取和精制方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：

（1）提取：取银杏干叶，粉碎，按药材重量加入含水乙醇加热回流提取3-4次，合并提取液，提取液用酸度调节剂调至PH为4-5，回收乙醇后得到提取浓缩液；

（2）制备银杏内酯富集物：提取浓缩液用有机溶剂分步萃取，萃取液减压浓缩干后，用含水乙醇溶解，过滤，滤液上大孔吸附树脂，用含水乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩干燥得银杏内酯富集物；

（3）制备银杏内酯粗品：银杏内酯富集物用有机溶剂溶解，过滤，滤液蒸干，用含水乙醇溶解，过聚酰胺和/或MCI-GEL层析柱，依次用不同浓度的含水乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压蒸干得银杏内酯粗品；

（4）结晶：银杏内酯粗品用含水乙醇分步结晶后得到高纯度的银杏内酯精制品；

本方法所得的银杏内酯含有银杏内酯A、B、C和白果内酯，总含量达95%-98%。

2.根据权利要求1所述银杏内酯的提取和精制方法，其特征在于，所述步骤(1)银杏干叶提取所用的含水乙醇浓度为40%-80%，乙醇的用量为药材重量的4-8倍W/W，提取次数为3-4次，每次提取时间为1-2小时；所用酸度调节剂为有机酸或无机酸。

3.根据权利要求2所述银杏内酯的提取和精制方法，其特征在于，所述步骤(1)有机酸选自柠檬酸、苹果酸、酒石酸或乙二酸，优选柠檬酸；无机酸选自2%-10%的稀盐酸或2%-10%的稀硫酸，优选5%的稀盐酸。

4.根据权利要求1所述银杏内酯的提取和精制方法，其特征在于，所述步骤(2)的分步萃取为：第一步用石油醚、庚烷、正己烷或环己烷中的一种或多种溶剂萃取，优选石油醚,溶剂用量为浓缩液量的1-1.5倍量，萃取3-4次，萃取液弃去，去除部分脂溶性杂质；第二步用乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酮、甲基乙基酮、正丁醇或异丁醇中的一种或多种溶剂萃取,优选乙酸乙酯，溶剂用量为浓缩液量的1-1.5倍量，萃取3-6次；分步萃取得到的萃取物用5%-50%含水乙醇溶解，优选10%-20%乙醇,乙醇用量为萃取物的0.5-3倍量V/W，乙醇溶解的溶液减压过滤后，滤液用大孔吸附树脂除杂。

5.根据权利要求4所述银杏内酯的提取和精制方法，其特征在于，步骤(2)所用大孔吸附树脂选自D101、DA201、ADS-17、HP20或HP20SS，优选D101，柱体积为药材量的1-1.5倍量V/W，洗脱剂为50%-60%乙醇，洗脱剂用量为2-5个柱体积，洗脱至洗脱液颜色变浅为止，得到的银杏内酯富集物，经HPLC-ELSD检测，银杏总内酯含银杏内酯A、B、C及白果内酯，总含量为9%-30%。

6.根据权利要求1所述银杏内酯的提取和精制方法，其特征在于，所述步骤(3)银杏内酯富集物使用丙酮或乙酸乙酯溶解、过滤，滤液蒸干，萃取物用乙醇溶解，过聚酰胺柱和/或MCI-GEL层析柱，使用0-50%乙醇水溶液洗脱，洗脱物减压浓缩至干得到粗品银杏总内酯；所述乙醇为5%-50%乙醇，优选10%-15%乙醇，乙醇用量为萃取物的0.1-1倍量V/W，优选0.2-0.5倍量V/W。

7.根据权利要求6所述银杏内酯的提取和精制方法，其特征在于，步骤(3)聚酰胺柱层析所用聚酰胺为30-60目，柱体积为萃取物的0.5-2倍量V/W，优选0.8-1.5倍量V/W，洗脱剂为0-50%乙醇，优选10%-30%乙醇，洗脱剂用量为2-8个柱体积，洗脱至洗脱液中不含银杏内酯为止。

8.根据权利要求6所述银杏内酯的提取和精制方法，其特征在于，步骤(3)所述MCI-GEL层析柱所用吸附树脂填料为MCI-GEL CHP系列反相吸附树脂，其技术参数为：粒径为75-150μm，平均粒径为120μm，PH范围为0-14，孔径为450埃，基体为聚苯乙烯和二乙烯基共聚物；所述MCI-GEL柱层析，柱体积为萃取物的0.1-2倍量V/W，优选0.5-1倍量V/W，洗脱剂为0-50%乙醇，优选30%-50%乙醇，洗脱剂用量为2-8个柱体积，洗脱至洗脱液中不含银杏内酯为止；所得粗品银杏总内酯总含量达60%-85%。