[发明专利]银杏内酯的提取和精制方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药，具体涉及中药的提取方法，尤其涉及从银杏叶中提取和精制活性成分银杏内酯的方法。

背景技术

银杏叶提取物作为制药的有效成分已被广泛应用。目前从银杏中分离得到的有效成分主要是二萜内酯和倍半萜内酯，即银杏内酯A、B、C、J、M和白果内酯。银杏内酯属二萜内酯，分子中都含有6个五元环，其中有3个γ-内酯环和1个四氢呋喃环，它们的侧链上均有一个叔丁基。白果内酯属倍半萜内酯，分子结构中仅含有一个戊烷。20世纪80年代以来，研究发现银杏内酯是血小板活化因子（PAF）的强拮抗剂，被认为是最有临床应用前景的天然PAF受体拮抗剂，对于缺血损伤和中枢神经系统具有保护作用，对于心脑血管疾病具有显著疗效。但由于银杏内酯结构复杂，人工合成难度极大，因此，通过银杏叶的提取得到已成为银杏内酯的主要来源。白果内酯有很强的生物活性，具有多方面的神经保护作用，包括促进神经生长、改善老年记忆功能、防止老年痴呆的发生等。然而，银杏叶中萜内酯（包括二萜内酯和倍半萜内酯）的含量极低，要得到其中具有高药用价值的银杏内酯和白果内酯，则必须将银杏叶或其粗提物进行再提取精制。目前文献报道的银杏内酯提取分离方法主要有：溶剂提取法，溶剂提取-色谱柱分离法、超临界提取分离法、高速逆流色谱法及模拟移动床色谱法等，其中应用最多的是色谱柱分离法，填料多采用硅胶、氧化铝及反相柱填料等。但这些纯化精制方法存在一些缺陷，不能高效、经济、环保地分离出高纯度的银杏内酯。因此寻找简便、经济、环保的银杏内酯提取和精制方法是近年来技术人员所关注的研究热点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，研究设计一种成本低、纯度高、得率较优、安全性好的银杏内酯提取和精制方法。本发明的目的是通过下述方法实现的：

本发明提供一种银杏内酯的提取和精制方法。

本发明方法包括下列步骤：

（1）提取：取银杏干叶，粉碎，按药材重量加入含水乙醇加热回流提取3-4次，合并提取液，提取液用酸度调节剂调至PH为4-5，回收乙醇后得到提取浓缩液；

（2）制备银杏内酯富集物：提取浓缩液用有机溶剂分步萃取，萃取液减压浓缩干后，得到的萃取物用含水乙醇溶解，过滤，滤液上大孔吸附树脂，用含水乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩干燥得银杏内酯富集物；

（3）制备银杏内酯粗品：银杏内酯富集物用有机溶剂溶解，过滤，滤液蒸干，用含水乙醇溶解，过聚酰胺和/或MCI-GEL层析柱，依次用不同浓度的含水乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压蒸干得银杏内酯粗品；

（4）结晶：银杏内酯粗品用含水乙醇分步结晶后得到高纯度的银杏内酯精制品。

本方法所得的银杏内酯含有银杏内酯A、B、C和白果内酯，总含量达95%-98%。

本发明方法所述步骤(1)银杏干叶提取所用的含水乙醇浓度为40%-80%，乙醇的用量为药材重量的4-8倍（W/W），提取次数为3-4次，每次提取时间为1-2小时。

步骤(1)所用酸度调节剂为有机酸或无机酸；有机酸选自柠檬酸、苹果酸、酒石酸或乙二酸，优选柠檬酸；无机酸选自2%-10%的稀盐酸或2%-10%的稀硫酸，优选5%的稀盐酸。

所述步骤(2)的分步萃取为：第一步用石油醚、庚烷、正己烷或环己烷中的一种或多种溶剂萃取，优选石油醚，溶剂用量为浓缩液量的1-1.5倍量，萃取3-4次，萃取液弃去，去除部分脂溶性杂质；第二步用乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酮、甲基乙基酮、正丁醇或异丁醇中的一种或多种溶剂萃取,优选乙酸乙酯溶剂用量为浓缩液量的1-1.5倍量，萃取3-6次。

步骤(2)分步萃取得到的萃取物用5%-50%含水乙醇溶解，优选10%-20%乙醇,含水乙醇用量为萃取物的0.5-3倍量（V/W）萃取物，乙醇溶解的溶液减压过滤后，滤液用大孔吸附树脂除杂。

步骤(2)所用大孔吸附树脂选自D101、DA201、ADS-17、HP20或HP20SS，优选D101，柱体积为药材量的1-1.5倍量（V/W），洗脱剂为50%-60%乙醇，洗脱剂用量为2-5个柱体积，洗脱至洗脱液颜色变浅为止。

步骤(2)得到的银杏内酯富集物，经HPLC-ELSD检测，银杏总内酯（含银杏内酯A、B、C及白果内酯）总含量为9%-30%。

所述步骤(3)银杏内酯富集物使用丙酮或乙酸乙酯溶解、过滤，滤液蒸干，萃取物用乙醇溶解，过聚酰胺柱和/或MCI-GEL层析柱，使用0-50%乙醇水溶液洗脱，洗脱物减压浓缩至干得到粗品银杏总内酯。