[发明专利]一种替度鲁肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于药物化学领域，尤其涉及一种替度鲁肽的制备方法。

背景技术

短肠综合征（short bowel syndrome，SBS）是指由于严重小肠疾病或外科手术切除大部分小肠导致机体无法正常吸收营养而引发一系列综合征。SBS降低了患者摄取液体和营养物质的能力，由于残余肠管过短，营养物质吸收消化障碍，可表现为腹泻、脂肪泻、体重下降，导致脱水和营养不良，严重者甚至会危及生命。短肠综合征患者多不能正常饮食，有些通过积极恰当的肠康复治疗后可恢复经口饮食，但有些则需终生依赖肠外营养。而肠外营养支持治疗又将增加全身感染和其他长期并发症的风险。迄今为止尚无药物可以治疗短肠综合征。

替度鲁肽，英文名为telaprevir，是一种胰高血糖素样肽2（GLP-2）类似物，一种天然生成的激素，可减少胃排空和分泌，并调节小肠内膜细胞的生长、增殖和修复。替度鲁肽于2001年被定性为孤儿药。临床试验表明，该药能够降低短肠综合征患者对胃肠外营养的需求。2012年6月，欧洲药品管理局（EMA）批准替度鲁肽(teduglutide)用于治疗成人短肠综合征。替度鲁肽分子式为C₁₆₄H₂₅₂N₄₄O₅₅S，分子量为3752.13，氨基酸组成如下：His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-lle-Leu-Asp-Asn-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-lle-Asn-Trp-Leu-lle-Gln-Thr-Lys-lle-Thr-Asp-OH。

目前关于替度鲁肽的制备，公开号为CN101824087A的专利中采用了纯固相顺序偶联的方法进行替度鲁肽的合成，具体方法为以wang树脂为载体，采用常规顺序偶联，最终切割得到替度鲁肽。而公开号为WO2012028602A1专利中为了解决上述专利保护替度鲁肽的合成方法中存在的Asp-Gly片段产生的降解等一系列问题，采用片段偶联方法进行了替度鲁肽的合成，即先合成全保护片段1-4，然后采用纯化后的片段1-4与片段肽树脂5-33进行固相偶联，最终裂解得到替度鲁肽。

然而研究人员发现，不论是采用公开号为CN101824087A的专利中的常规的逐步偶联方法还是按照公开号为WO2012028602A1专利进行固相片段缩合方法制备替度鲁肽都存在His1容易消旋的问题。由于His的消旋，导致制得的替度鲁肽难以纯化，从而导致替度鲁肽收率降低。此外，公开号为WO2012028602A1专利采用片段1-4与片段肽树脂5-33进行固相偶联的方法制备替度鲁肽，仍然不能有效解决3-4位的Asp-Gly结构所带来的降解等副反应，同样会使制得的替度鲁肽难以纯化，进一步导致替度鲁肽收率降低。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于针对现有技术的缺陷，提供一种收率高的替度鲁肽的制备方法，所述制备方法可以有效避免3-4位的Asp-Gly结构所带来的降解等副反应，同时也可以降低His¹消旋，从而有效提高粗肽纯度，提高纯化收率。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种替度鲁肽的制备方法，包括：

步骤1：将Fmoc-Asp(OtBu)-OH与固相载体偶联，得到Fmoc-Asp(OtBu)-Resin；

步骤2：Fmoc-Asp(OtBu)-Resin按照替度鲁肽顺序逐一偶联Fmoc保护的替度鲁肽的4-32位氨基酸得到替度鲁肽4-33片段肽树脂H-Gly-Ser(tBu)-Phe-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Ile-Leu-Asp(OtBu)-Asn(Trt)-Leu-Ala-Ala-Arg(pbf)-Asp(OtBu)-Phe-Ile-Asn(Trt)-Trp(Boc)-Leu-Ile-Gln(Tr t)-Thr-Lys(Boc)-Ile-Thr(tBu)-Asp(OtBu)-Resin；

步骤3：固相合成替度鲁肽1-3片段肽树脂Boc-His(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Resin，然后裂解得到替度鲁肽全保护1-3肽片段Boc-His(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-OH；

步骤4：替度鲁肽4-33片段肽树脂在固相上偶联替度鲁肽全保护1-3肽片段，得到替度鲁肽树脂；

步骤5：替度鲁肽树脂裂解得到替度鲁肽粗肽；