[发明专利]检测人PGII蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法

权利要求书

1.一种用于定量检测待测物中人PGII蛋白的荧光免疫层析试纸，该试纸通过双抗体夹心法检测所述人PGII蛋白，其中：

所述双抗体夹心法采用标记有荧光微球的第一PGII单克隆抗体作为捕获抗体，所述第一PGII单克隆抗体来源于人PGII抗原表位肽(1)和(2)中的一者；并且

所述双抗体夹心法采用第二PGII单克隆抗体作为检测抗体，所述第二PGII单克隆抗体来源于人PGII抗原表位肽(1)和(2)中的另一者；

所述人PGII抗原表位肽(1)和(2)分别为：

(1)Lys-Lys-Phe-Lys-Ser-Ile-Arg-Glu-Thr-Tyr；

(2)Tyr-Thr-Pro-Ser-Arg-Ala-Ala-Pro-Pro-Ser-Ser-Thr-Leu-Gln-Leu-Pro-Glu-Lys。

2.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述第一PGII单克隆抗体是由第一PGII抗原制备而成的，该第一PGII抗原是通过使所述人PGII抗原表位肽(1)和(2)中的一者与载体蛋白偶联制备而成的；并且

所述第二PGII单克隆抗体是由第二PGII抗原制备而成的，该第二PGII抗原是通过使所述人PGII抗原表位肽(1)和(2)中的另一者与载体蛋白偶联制备而成的。

3.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述荧光微球的粒径为320nm至400nm。

4.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述荧光微球上的荧光物质为异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明或X-罗丹明，其中优选为X-罗丹明；所述荧光微球的微球材料为聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯或甲基丙烯酸甲酯的共聚物。

5.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述荧光微球的激发波长为350～600nm，优选为390nm；发射波长为500～700nm，优选为615nm。

6.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述试纸具有底板，并且在该底板上沿使用时的层析方向依次以接触方式设置有：样品垫、结合垫、反应膜、吸水滤纸，所述结合垫包被有所述的标记有荧光微球的第一PGII单克隆抗体，所述反应膜包括检测区和质控区，所述检测区包被有所述第二PGII单克隆抗体，所述质控区包被有能与所述的标记有荧光微球的第一PGII单克隆抗体特异性结合的抗抗体。

7.根据权利要求6所述的荧光免疫层析试纸，其中所述反应膜为在大于550nm的波长下基本上不发荧光的硝酸纤维素膜。

8.根据权利要求6所述的荧光免疫层析试纸，其中所述底板基本上不具有荧光性质。

9.根据权利要求6所述的荧光免疫层析试纸，其中所述抗抗体为羊抗鼠IgG单克隆抗体或兔抗鼠IgG单克隆抗体，其中优选为羊抗鼠IgG单克隆抗体。

10.一种制备根据权利要求1至9中任意一项所述的荧光免疫层析试纸的方法，其包括以下步骤：

1）提供标记有荧光微球的第一PGII单克隆抗体；

2）提供结合垫，其中在所述结合垫上包被所述的标记有荧光微球的第一PGII单克隆抗体；

3）提供反应膜，其中在所述反应膜上沿使用时的层析方向间隔固定第二PGII单克隆抗体和抗抗体，以分别形成检测区和质控区；和

4）在底板上沿使用时的层析方向依次以接触方式设置样品垫、所述结合垫、所述反应膜、吸水滤纸，从而制成所述荧光免疫层析试纸。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述步骤1）包括：

a）用碳二亚胺活化荧光微球，优选地，将荧光微球的水分散液或MES缓冲液分散液经超声波处理并与碳二亚胺混合，从而活化所述荧光微球；

b）洗涤步骤a）所获得的活化的荧光微球，优选地，将步骤a）所获得的活化的荧光微球用N-羟基硫代琥珀酰亚胺-柠檬酸缓冲液洗涤、分散，并经超声波处理；

c）用步骤b）所获得的荧光微球标记第一PGII单克隆抗体，优选地，将步骤b）所获得的荧光微球与第一PGII单克隆抗体混合，用BSA-乙醇胺缓冲液封闭，离心，用BSA-吐温水溶液分散，经超声波处理，从而得到标记有荧光微球的第一PGII单克隆抗体。