[发明专利]检测人PGII蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于多肽化学和免疫学领域，具体涉及人胃蛋白酶原II（PGII）抗原表位肽、用该抗原表位肽制备的PGII特异性抗原和相应的单克隆抗体或多克隆抗体、所述抗体在制备人PGII体外诊断试剂盒上的用途，人PGII体外诊断试剂盒，以及一种用于定量检测待测物中人PGII蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法。

背景技术

胃蛋白酶原（PG）是胃液中胃蛋白酶的无活性前体。人胃蛋白酶原按其电泳迁移率由快至慢，可分为PG1至PG7七种同工酶原，并且根据其生化性质、免疫原性、细胞来源以及组织内分布可分为PGI和PGII两个亚群。七种同工酶原中的PG1至PG5免疫原性近似，称为胃蛋白酶原I（PGI），其主要由胃腺的主细胞和黏液颈细胞分泌；PG6至PG7被称为胃蛋白酶原II（PGII），除了由胃体和胃底黏膜的泌酸腺的主细胞分泌外，泌酸腺的黏液颈细胞、贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液细胞以及十二指肠上段的Brunner腺也能产生PGII。胃几乎是PG的唯一来源，并且在分泌阶段的分泌量会发生变化。血清PGI和PGII反映了胃粘膜不同部位的分泌功能。合成后的PG大部分进入胃腔，在酸性胃液作用下活化成胃蛋白酶，只有少量PG（约1%）透过胃黏膜毛。因此，血清PG浓度可以反映其分泌水平。正常人血清中的PGI是PGII的6倍，当胃黏膜发生病理变化时，血清PG含量也随之发生改变。

血清PG含量与幽门螺杆菌（HP）感染、慢性胃炎、胃癌等相关。在不同胃部疾病中，血清PGI、PGII和PGI/PGII的值发生相应变化，其升高、降低还是不变并不一致，作为诊断或治疗结果指标的灵敏度和特异度也各不相同。因此，对于不同胃部疾病，血清PGI、PGII和PGI/PGII的值也有不同的判断标准。

胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其病死率居各种恶性肿瘤之首，其早期诊断、早期治疗成为提高患者生存质量、降低病死率的唯一途径。国内外学者对胃癌患者血清PG变化作了大量的研究发现：当患胃癌时，血清PGI水平降低，PGII水平基本保持正常或升高，进而，测定血清PGI的水平和PGI/PGII的比值有助于胃癌的鉴别诊断，过低的PGI和PGI/PGII应警惕早期胃癌。由于血清PG的含量直接反映胃黏膜的功能，因此胃癌患者血清PGI水平明显下降，表明胃癌患者胃黏膜分泌能力下降。80％以上的胃癌伴有萎缩性胃炎，而萎缩性胃炎可导致胃黏膜主细胞丢失，从而影响其分泌功能；胃癌患者血清PGI水平明显下降与胃癌患者胃黏膜萎缩、肠化从而分泌降低有关。因此血清PGI及PGI/PGII明显下降对监测早期胃癌具有重要的临床意义，可有效应用于胃癌高发区人群的初步筛查。PG检测作为非侵入性方法，可降低胃病患者或胃癌高危人群检查的痛苦，并且简便、经济，具有重大意义。

检测血清中的PGII水平的最理想的方法是免疫测定。因此，寻找合适的具有免疫原性的PGII抗原表位肽、制备特异性的PGII抗原及抗体即成为了重点。

荧光免疫层析方法测血液中的待测物操作简便、快速，只需10分钟就能完成样品检测，并且检测范围宽，灵敏度好，能够迅速及时地帮助诊断病情，监测预后。中国专利申请No.200910117820.8公开了一种荧光微球免疫层析试纸条的制备方法及定量检测方法；中国专利申请No.200910047352.1公开了一种荧光免疫层析试纸及其制备方法和应用。然而，目前还没有针对人PGII蛋白的荧光免疫层析试纸。

发明内容

为解决上述现有技术中所存在的问题，本发明提供了一种用于定量检测待测物中人PGII蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法。

具体而言，本发明提供了：

一种用于定量检测待测物中人PGII蛋白的荧光免疫层析试纸，该试纸通过双抗体夹心法检测所述人PGII蛋白，其中：

所述双抗体夹心法采用标记有荧光微球的第一PGII单克隆抗体作为捕获抗体，所述第一PGII单克隆抗体来源于人PGII抗原表位肽(1)和(2)中的一者；并且

所述双抗体夹心法采用第二PGII单克隆抗体作为检测抗体，所述第二PGII单克隆抗体来源于人PGII抗原表位肽(1)和(2)中的另一者；

所述人PGII抗原表位肽(1)和(2)分别为：

(1)Lys-Lys-Phe-Lys-Ser-Ile-Arg-Glu-Thr-Tyr；

(2)Tyr-Thr-Pro-Ser-Arg-Ala-Ala-Pro-Pro-Ser-Ser-Thr-Leu-Gln-Leu-Pro-Glu-Lys。