[发明专利]一种液固双相发酵生产绿色木霉的方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物发酵应用技术领域，具体涉及一种液固双相发酵生产绿色木霉的方法。

背景技术

香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌引起的一种土传毁灭性的病害，已严重危害到香蕉的生产及香蕉产业。目前综合防控技术是香蕉枯萎病防治的主要手段，木霉（Trichoderma spp.）作为一种重要的植病生防菌一直受到普遍关注。绿色木霉菌(Trichoderma viride)广泛地分布于自然界，可在多种营养基质上快速生长，对多种植物病原菌有重寄生作用，能有效地竞争营养和生存空间，还可以产生抗生素和攻击多种病原所需要的酶，所以被认为是一种很有开发潜力的生防菌。

现有的绿色木霉菌的培养方法都存在生产周期长、菌剂含孢量低、成本高的问题，阻碍了绿色木霉菌的生产进程。

发明内容

本发明的目的是提供一种液固双相发酵生产绿色木霉的方法。

本发明提供的培养绿色木霉的方法，包括如下步骤：

（1）将绿色木霉进行液体发酵，得到液体发酵产物；

（2）将液体发酵产物进行以膨胀蛭石为载体的固体发酵。

所述液体发酵的条件可为：27-29℃，通入空气且通气量为9-11L/min，0.02-0.04Mpa。所述液体发酵的条件具体可为：28℃，通入空气且通气量为10L/min，0.03Mpa。所述液体发酵的发酵体系具体可为60-65L。

所述液体发酵可进行至发酵体系呈如下状态：有菌丝及液生孢子、无断裂的菌丝且菌丝体中无液泡。

所述液体发酵的时间可为65小时-72小时，具体可为65小时、68小时或72小时。

所述液体发酵是在液体发酵培养基中进行的；所述液体发酵培养基的制备方法如下：取蔗糖9-11g、玉米粉9-13g、NH₄NO₃1.8-2.2g、大豆粕4-5.5g、MgSO₄·7H₂O0.8-1.2g和KH₂PO₄2-4g，溶于水并用水定容至1000mL。所述液体发酵培养基的制备方法具体如下：取蔗糖10g、玉米粉9-13g、NH₄NO₃2g、大豆粕4-5.5g、MgSO₄·7H₂O1g和KH₂PO₄2-4g，溶于水并用水定容至1000mL。所述液体发酵培养基的制备方法具体如下：取蔗糖10g、玉米粉11g、NH₄NO₃2g、大豆粕4.5g、MgSO₄·7H₂O1g，KH₂PO₄3g，溶于水并用水定容至1000mL。所述液体发酵培养基的pH具体可为6.5。

所述固体发酵依次包括a阶段、b阶段和c阶段：

a阶段：在温度为23-25℃、湿度为93-97%的条件下培养；

b阶段：在温度为27-29℃、湿度为78-82%的条件下培养；

c阶段：在温度为25-27℃、湿度为38-42%的条件下培养。

所述a阶段具体可为：在温度为24℃、湿度为95%的条件下培养。所述b阶段具体可为：在温度为28℃、湿度为80%的条件下培养。所述c阶段具体可为：在温度为26℃、湿度为40%的条件下培养。所述a阶段中，培养时间可为2-3天。所述b阶段中，培养时间可为3天。所述c阶段中，培养时间可为1天。