[发明专利]一种鉴定药用植物三叶青的方法

权利要求书

1.一种鉴定药用植物三叶青的方法，其特征是，通过以下步骤实现：

（1）提供用于三叶青鉴定的DNA片段，其核苷酸序列如SEQ NO 1所示，该核苷酸片段来源于ISSR通用引物UBC843扩增所得的三叶青特异性核苷酸序列，除ISSR引物结合位点外长1773bp，其中带下划线的部分49-69bp和1748-1766bp分别为本发明的三叶青聚合酶链反应引物Thk1和Thk2的结合位点；

（2）提供来源于上述DNA片段的三叶青专一性聚合酶链反应引物，所述引物的核苷酸序列为：SEQ NO 2：5'-TCGTATTTTCCTACTCTTGTT-3' 或SEQ NO 3 ：5'-CTCACTTTCTCCATCTTCG-3'；

（3）鉴定三叶青的方法：采用常规PCR法：以步骤（2）所述的PCR引物，进行PCR反应，具体步骤和过程按常规PCR方法的操作进行：94℃  5 min，（94℃  30 sec，61℃ 45 sec，72℃ 1.5 min，）循环35次，72℃ 10 min，4℃保温；若在分子量1800bp左右有条带出现，则为三叶青；若在分子量1800bp左右没有条带出现，则不是三叶青。

2.根据权利要求1所述的一种鉴定药用植物三叶青的方法，其特征在于，步骤（2）所述引物来源于SEQ NO 1核酸序列的1段或2段19或21个核苷酸的的长的寡核苷酸序列或它们的互补序列；或者是上述这些序列经修饰、变化、且其核苷酸变化量不超过10%的序列。

3.根据权利要求1所述的一种鉴定药用植物三叶青的方法在鉴定药用植物三叶青中的应用。