[发明专利]一种合成靶向性放射性碘标记甲状腺球蛋白纳米胶囊的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种治疗甲状腺癌的药物，尤其涉及一种治疗甲状腺癌的纳米微胶囊。

背景技术

甲状腺癌是内分泌系统最常见的肿瘤，其发病率正在逐年上升，其中最常见的是分化型甲状腺癌(DTC，约占94％)，通过甲状腺全切+放射性¹³¹I治疗+T4抑制治疗，较其他肿瘤，往往预后较好。然而30％DTC病灶在治疗过程中会发生失分化，失分化病灶摄碘功能丧失，常规直接口服碘-131无法奏效，病人预后差。目前对于促进DTC失分化病灶再分化、提高其碘摄取能力，主要有两种尝试。第一种是利用基因转染技术将NIS和TPO基因引入DTC失分化病灶，恢复其摄碘能力，但是摄取的碘迅速外流，难以杀死肿瘤细胞，且这种尝试仍停留在基础研究，临床实用性差。第二种尝试是使用具有调节细胞增殖和分化作用的药物诱导DTC失分化病灶再分化恢复摄碘能力，但存在的问题是副作用大、甲状腺癌细胞摄碘功能不能稳定上升。

因此，本领域的技术人员致力于开发一种靶向性的治疗甲状腺癌特别是分化型甲状腺癌的有效药物，以提高甲状腺癌的治疗效果。

发明内容

有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明设计合成了一种全新的靶向性单蛋白纳米胶囊系统，具有碘-131携带量大、生物半衰期长、非靶组织摄取碘-131量低，治疗副作用少等优点。

为实现上述目的，本发明提供了一种合成靶向性放射性碘标记甲状腺球蛋白纳米胶囊的方法，包括如下步骤：

1)、合成甲状腺球蛋白纳米胶囊

在甲状腺球蛋白表面合成一层聚合物凝胶，聚合物包括但不限于聚乙二醇、单甲醚聚乙二醇、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚丙烯酰胺，合成蛋白纳米胶囊，针对合成的纳米胶囊，以SDS-PAGE、琼脂糖凝胶电泳、动态光散射(DLS)、Zeta电位测定等方法对其结构进行鉴定。

具体操作为，取10mg甲状腺球蛋白与1mg N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺室温下反应一个小时后，用截留分子量3000的透析袋在PBS中透析24小时。在透析后的蛋白溶液中依次加入5mg甲基丙烯酸、1mg N，N-亚甲基双丙烯酰胺、0.1mg过硫酸钾和1μL四甲基二乙胺，温和搅拌室温下反应2小时；反应完成后在截留分子量100000透析袋中透析3天，以制得羧基化的甲状腺球蛋白纳米胶囊。针对合成的纳米胶囊，以SDS-PAGE、琼脂糖凝胶电泳、动态光散射(DLS)、Zeta电位测定等方法对其结构进行鉴定。

2)、合成靶向性甲状腺球蛋白纳米胶囊

将改性的葡萄糖或葡萄糖类似物(比如氨基葡萄糖)化学键合在胶囊表面，借此赋予纳米胶囊对肿瘤部位的靶向性作用。选用表面进行了羧基化的甲状腺球蛋白纳米胶囊，利用羧基与氨基葡萄糖之间的酰胺化反应，完成葡萄糖及其类似物在纳米胶囊表面的修饰。

具体操作为，取10mg甲状腺球蛋白纳米胶囊依次加入1mg N-羟基丁二酰亚胺和2mg1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和5mg氨基葡萄糖，室温反应一个小时后，透析除去过量的投料，得到表面氨基化的甲状腺球蛋白纳米胶囊，借此赋予纳米胶囊对肿瘤部位的靶向性作用。

3)、放射性碘标记

由于每个纳米胶囊内部包裹有一个甲状腺球蛋白，而甲状腺球蛋白上存在大量的酪氨酸残基，因此可以利用已有的成熟方法-Iogogen标记技术对其进行放射性碘-131/碘-125直接标记。利用放射性薄层色谱仪测定(Radio-TLC)标记率；将标记物置于生理盐水或小牛血清其体外/体内稳定性。

优选地，步骤1)和步骤2)之间可以添加如下步骤，以调控甲状腺球蛋白纳米胶囊的表面物理化学特性。

选择合适的单体调节纳米胶囊的体内分布和循环、表面改性能力和细胞摄碘能力。所选用单体包括但不限于聚乙二醇、丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酰胺。通过单体的用料比例，调节所得纳米胶囊的尺寸分布；通过选用特定性能的单体，调节所得纳米胶囊的表明性能。

以下将结合附图对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本发明的目的、特征和效果。

附图说明

图1是本发明的一个较佳实施例的流体力学尺寸分布

图2是本发明的一个较佳实施例的Zeta电位

图3是本发明的一个较佳实施例的透射电镜照片

具体实施方式

实施例1

本实施例提供了一种优选地合成靶向性放射性碘标记甲状腺球蛋白纳米胶囊的方法，包括如下步骤：

1)、合成甲状腺球蛋白纳米胶囊