[发明专利]MDM2基因受体改造的T细胞的制备方法

权利要求书

1.一种MDM2基因受体改造的T细胞的制备方法，包括如下步骤：

（1）将MDM2基因受体通过慢病毒载体转染入培养成熟的单个核细胞CIK细胞；

（2）使表达MDM2受体的CIK细胞进行有效扩增得到M-CIK细胞，即获得所述MDM2基因受体改造的T细胞。

2.根据权利要求1所述的MDM2基因受体改造的T细胞的制备方法，其特征在于，所述慢病毒载体用来表达一个由单链抗体、跨膜区域和一个细胞内信号区域联结组成的MDM2基因受体。

3.根据权利要求1所述的MDM2基因受体改造的T细胞的制备方法，其特征在于，所述MDM2基因受体通过2A肽序列与多种共刺激受体CD28，4-1BBL和CD80相联结。

4.根据权利要求1所述的MDM2基因受体改造的T细胞的制备方法，其特征在于，所述成熟的单个核细胞CIK细胞是指将人体外周血中提取的单个核细胞采用IFN-γ、IL-1α、IL-2、CD3单抗细胞因子刺激，培养成为成熟的CIK细胞。

5.根据权利要求4所述的MDM2基因受体改造的T细胞的制备方法，其特征在于，所述细胞因子IFN-γ、IL-1α、IL-2、CD3单抗的浓度分别为1000-2000U/ml、100-200U/ml、1000-2000U/ml、50-100ng/ml。

6.根据权利要求1所述的MDM2基因受体改造的T细胞的制备方法，其特征在于，所述有效扩增是指所得到的扩增细胞90%以上为有效M-CIK细胞，50ml外周血14天扩增细胞量在10¹⁰个以上。

7.根据权利要求6所述的MDM2基因受体改造的T细胞的制备方法，其特征在于，所述有效M-CIK细胞是指MDM2受体表达率在90%以上，CD3+表型在90%以上，CD3+CD56+表型在20%以上，对肺鳞癌细胞SK-MES-1的杀瘤率在90%以上，其中杀瘤率的效靶比为10:1。

8.一种M-CIK细胞，为根据权利要求1-7任一所述的MDM2基因受体改造的T细胞的制备方法制得。