[发明专利]miRNA检测探针、试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种miRNA检测探针，其特征是，包括：

（1）杂交探针：其5'端为tag标签序列，3'端为结合序列，所述tag标签序列和所述结合序列之间还设有待检测靶标miRNA反向互补序列；所述结合序列为polyA序列或为oligoCCA序列，其长度为8-20个碱基；

（2）信号探针：其5'端为信号序列，3'端为polyT或oligoTGG；所述polyT或oligoTGG是杂交探针中结合序列的反向互补序列；所述信号序列为Oligo GT、Oligo TG或Oligo GTT序列，其长度为60-90个碱基。

2.根据权利要求1所述的miRNA检测探针，其特征是，所述结合序列的长度为9-11个碱基。

3.根据权利要求1所述的miRNA检测探针，其特征是，所述信号序列的长度为89-90个碱基。

4.一种miRNA检测试剂盒，其特征是，包括以下组份：

A、权利要求1-3任一项所述的检测探针；

B、包被有anti-tag序列的微珠，所述anti-tag序列与杂交探针5’端的tag序列互补配对。

5.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征是，还包括有生物素标记的dCTP、dATP、dTTP或dGTP。

6.根据权利要求4或5所述的miRNA检测试剂盒，其特征是，所述anti-tag序列与微珠之间连接有间隔臂序列。

7.根据权利要求6所述的miRNA检测试剂盒，其特征是，所述间隔臂为序列为5～10个T。

8.根据权利要求4或5所述的miRNA检测试剂盒，其特征是，所述tag序列选自SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.5中的一条或多条。

9.一种检测miRNA的方法，其特征是，包括以下步骤：

1）将杂交探针和信号探针，与生物素标记的dCTP、dATP、dTTP或dGTP进行延伸反应，形成信号标记复合体；

所述杂交探针的5'端为tag标签序列，3'端为结合序列，所述tag标签序列和所述结合序列之间还设有待检测靶标miRNA反向互补序列；所述结合序列为polyA序列或为oligoCCA序列，其长度为8-20个碱基；

所述信号探针的5'端为信号序列，3'端为polyT或oligoTGG；所述polyT或oligoTGG是杂交探针中的结合序列的反向互补序列；所述信号序列为Oligo GT、Oligo TG或Oligo GTT序列，其长度为60-90个碱基；

2）与待检测的样本杂交；

3）加入包被有anti-tag序列的微珠进行捕获反应，所述anti-tag序列与杂交探针5’端的tag序列互补配对；

4）RNase酶切消化；

5）用SA-PE进行孵育，检测。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征是，所述结合序列的长度为9-11个碱基；所述信号序列的长度为89-90个碱基。

11.根据权利要求9所述的检测方法，其特征是，所述anti-tag序列与微珠之间连接有间隔臂序列。

12.根据权利要求11所述的检测方法，其特征是，所述间隔臂为序列为5～10个T。

13.根据权利要求9-12任一项所述的检测方法，其特征是，所述tag序列选自SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.5中的一条或多条。