[发明专利]一种从赭色小莫勒菌中提取藿烷醇的方法

说明书

技术领域

    本发明涉及一种从赭色小莫勒菌中提取化合物藿烷醇的方法。

背景技术

莫勒菌是虫生真菌的重要成员，由于它能引起粉虱和介壳类昆虫群体性流行病的发生，这使得它有可能成为有用的生物防治剂。虫生真菌的代谢产物中含有多肽、生物碱、萜类化合物、甾醇等多种具有杀虫、抗肿瘤、抗炎、抗菌等活性物质，因此，充分开发利用虫生真菌，将有利于人类医疗水平的发展。

近年来人们发现莫勒菌的代谢产物具有抗菌、抗肿瘤和抗疟原虫等生物活性，这预示该菌在生物农药或医药上存在很大应用价值。

藿烷醇是藿烷类生物合成中的一个重要的前体，而藿烷类物质多具有抗肿瘤、抗炎、抗菌等活性，可以通过对藿烷醇的结构修饰生成各种新的活性物质。目前，尚未有在莫勒菌中发现藿烷醇的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种从赭色小莫勒菌中提取化合物藿烷醇的方法，以促进其药理学的进一步研究和临床上更好的开发和应用。

本发明采取的技术方案如下：

一种从赭色小莫勒菌中提取藿烷醇的方法，包括以下步骤：

1）              赭色小莫勒菌活化后，取菌块接种PDB培养基中，在120~160r/min、20~28℃条件下连续培养5~10天即初级培养，按8％~10％接种量再次转接到PDB培养基中，继续在120~160r/min、20~28℃条件下连续培养25~30天即次级培养；

2）              将培养液用减压抽滤装置过滤，得菌丝体和菌液，菌液直接用乙酸乙酯萃取，萃取液经旋转蒸发仪旋蒸得浸膏；菌丝体在28-35℃下干燥后研磨成粉状，加1~2倍体积的乙酸乙酯浸泡10～14小时，超声20～40分钟，浸提液经旋蒸得菌丝体浸膏，回收乙酸乙酯；

3）              将浸膏进行减压粗分，分别以石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇为洗脱剂依次进行洗脱，收集乙酸乙酯部分，经旋蒸得粗品；

4）              以石油醚：丙酮体积比=50:1～1:1梯度洗脱，收集石油醚：丙酮=10:1部分洗脱液，旋蒸浓缩，氯仿溶解，溶解液自然挥干，再经石油醚、甲醇重结晶得藿烷醇。

其中，所述步骤1）中PDB培养基为：200g马铃薯，20g葡萄糖，沸水煮30min，经4层纱布过滤后加单蒸水定容至1L，121℃高压灭菌20min。

所述步骤1）中接种菌块的大小为1×1cm，接种量为2块。

所述步骤2）中菌液用乙酸乙酯萃取具体操作为：将菌液与乙酸乙酯按体积比1：1混合，倒入分液漏斗中，摇瓶萃取菌液2~4次，每次3～5min。

所述步骤3）中进行粗分时减压柱的柱高7~10 cm，所用硅胶为200~300目。

所述步骤4）中将粗品进行梯度洗脱时，石油醚和丙酮的体积比每次降低10个单位，即梯度为50:1，40:1，30:1，20:1，10:1，1:1。

本发明首次在莫勒菌中发现藿烷醇，并对其进行提取和纯化。

本发明的显著优点：

1）    原料取材简单；

2）    提取步骤简单，成本低；

3）    制得的化合物纯度高。

附图说明

图1提取的藿烷醇的纯度验证图

图2 提取的藿烷醇¹H NMR谱

图3 提取的藿烷醇的¹³C NMR谱

图4提取的藿烷醇的¹³C NMR谱(下)和DEPT 135谱(上) 

图5提取的藿烷醇的EI-MS谱

图6藿烷醇的化学结构图

具体实施方式

以下是本发明的几个具体实施例，进一步说明本发明，但是本发明不仅限于此。

实施例1