[发明专利]一种分枝杆菌增菌液及其制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物培养技术领域，具体涉及一种分枝杆菌增菌液及其制备方法及应用。

背景技术

20世纪80年代后，全球感染结核杆菌的病例逐年上升。根据WHO统计数据，2011年，140万人死于结核病，非洲人均死亡率最高。耐多药结核病是一个主要威胁，对结核病患者的护理始于有质量保证的诊断，通过临床标本中结核分枝杆菌的生长和鉴定及对生物体药敏测试来确认或排除耐药性。由于诊断治疗延误及不规范用药导致出现多重耐药菌株，直接威胁结核病患者的生命，因此扩大结核病和耐多药结核病的诊断能力是全球结核病控制的重点。WHO报告指出采用快速诊断制剂并相应加强实验室能力是国内国际资金应投入的四个重点领域之一。

分枝杆菌为专性需氧菌，营养要求较高且不宜吸收营养物质，生长缓慢，所以结核分枝杆菌的增菌培养在临床检验中关键步骤之一。传统的分枝杆菌固体培养基由于营养成分需要扩散到表面才能被分枝杆菌吸收利用，对分枝杆菌培养需时较长；随后出现的液体培养基，在一定程度上缩短了培养时间，却不能简易检测分枝杆菌的生长状况。传统的分枝杆菌标本分离培养方法简单、经济，易于推广使用，但存在着检测周期长、阳性检出率低等缺点。如何快速检测结核分枝杆菌已成为该领域中迫切需要解决的课题。

发明内容

为解决上述现有技术的不足，本发明提供一种分枝杆菌增菌液及其制备方法及应用，该增菌液可用于分离和培养分枝杆菌，且能够快速检测结核分枝杆菌。

一种分枝杆菌增菌液，包括肉汤0.47-0.60份、脑心浸液肉汤0.5-1.0份、生物素0.0001-0.0003份、甘油0.25-0.63份、聚茴香脑磺酸钠0.01-0.03份、吐温80为0.01-0.03份、牛血清蛋白0.5-1.0份、油酸0.05-0.10份、蒸馏水100份。

上述方案优选的是，所述肉汤为Middlebrook 7H9肉汤。

上述任一方案优选的是，肉汤0.47份、脑心浸液肉汤0.5份、生物素0.0002份、甘油0.252份、聚茴香脑磺酸钠0.02份、吐温80为0.02份、牛血清蛋白0.5份、油酸0.06份、蒸馏水100份。

上述任一方案优选的是，还包括0.10-0.125份的胰蛋白胨和/或酪蛋白水解物。

上述任一方案优选的是，所述胰蛋白胨和/或酪蛋白水解物为0.12份。

一种分枝杆菌增菌液的制备方法，包括如下步骤：

(1)称取原料：取肉汤0.47-0.60份、脑心浸液肉汤0.5-1.0份、甘油0.25-0.63份、聚茴香脑磺酸钠0.01-0.03份、吐温80为0.01-0.03份、油酸0.05-0.10份均放置在灭菌后的容器中；

(2)原料混合：向步骤(1)中的容器中加入蒸馏水80份，并用玻璃棒搅拌容器中的混合物，使混合物均匀混合；

(3)调节pH值：向步骤(2)中的混合物中加入NaOH溶液和/或HCl溶液调节pH值，使混合物的pH值达到7.0-7.2；

(4)灭菌：将步骤(3)中调节pH值后的混合物进行湿热灭菌，灭菌后冷却至室温；

(5)称取生物素和牛血清蛋白：取0.0001-0.0003份的生物素和0.5-1.0份的牛血清蛋白放入灭菌后的容器中，然后向容器中加入20份的蒸馏水，并用玻璃棒搅拌，使生物素和牛血清蛋白溶解在蒸馏水中，形成混合溶液；

(6)过滤除菌：将步骤(5)中的混合溶液经无菌滤膜过滤除菌，此过程为无菌操作；

(7)无菌原料混合：将步骤(6)中的除菌后的混合溶液加入到步骤(4)中湿热灭菌后的混合物中，此过程为无菌操作。

上述方案优选的是，步骤(1)中肉汤0.47份、脑心浸液肉汤0.5份、甘油0.25份、聚茴香脑磺酸钠0.02份、吐温80为0.02份、油酸0.06份。

上述任一方案优选的是，步骤(1)中所述原料还包括0.10-0.125份的胰蛋白胨和/或酪蛋白水解物。

上述任一方案优选的是，胰蛋白胨和/或酪蛋白水解物为0.12份。

上述任一方案优选的是，步骤(3)中所述NaOH溶液的摩尔浓度为0.1mol/l。

上述任一方案优选的是，步骤(3)中所述HCl溶液的摩尔浓度为0.1mol/l。

上述任一方案优选的是，步骤(4)中所述湿热灭菌温度为115-121℃，所述湿热灭菌时间为15-20分钟。

上述任一方案优选的是，步骤(4)中所述湿热灭菌温度为121℃，所述湿热灭菌时间为20分钟。