[发明专利]一种提高牛虻抗血栓酶kfpase生物活性的复性方法在审
申请号: | 201310388577.X | 申请日: | 2013-08-29 |
公开(公告)号: | CN104419694A | 公开(公告)日: | 2015-03-18 |
发明(设计)人: | 秦引林;韩承业 | 申请(专利权)人: | 江苏柯菲平医药股份有限公司 |
主分类号: | C12N9/68 | 分类号: | C12N9/68 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 210016 江苏省南京市中山*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 提高 牛虻 血栓 kfpase 生物 活性 复性 方法 | ||
1.一种提高牛虻抗血栓酶kfpase生物活性的复性方法,利用凝胶过滤层析进行,包括以下步骤:
(1)柱平衡:用流动相I平衡凝胶过滤柱;泵入5%-10%柱体积的流动相II;其中流动相I为三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)20-50mmol/L,pH8.0-9.5,L-精氨酸200-500mmol/L,还原型谷胱甘肽1-3mmol/L,氧化型谷胱甘肽0.2-0.6mmol/L,流动相II为尿素6-8mol/L,三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)20-50mmol/L,pH8.0-9.5,L-精氨酸200-500mmol/L,还原型谷胱甘肽1-3mmol/L,氧化型谷胱甘肽0.2-0.6mmol/L;
(2)上样:泵入变性蛋白;
(3)洗脱:继续用流动相I洗脱凝胶过滤柱,蛋白在通过凝胶过滤柱时,逐渐将尿素的浓度降低,进而蛋白有足够的时间折叠成天然的形态。
2.根据权利要求1所述的复性蛋白的方法,其特征在于凝胶过滤层析的介质为Superdex75、Superose6或者Sephacryl S-200。
3.根据权利要求1所述的复性蛋白的方法,其特征在于步骤(1)中的柱体积为400ml。
4.根据权利要求1所述的复性蛋白的方法,其特征在于所有步骤均是在AKTA上操作的。
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