[发明专利]一种用于聚乙二醇干扰素的偶联方法

权利要求书

1.一种用于聚乙二醇干扰素的偶联方法，其包括以下步骤：

A、将重组人干扰素浓缩液与活化聚乙二醇溶液混合充分进行偶联反应后，再以pH4.5的10 mM醋酸钠缓冲液终止上述反应，得到偶联反应液；

B、将所述偶联反应液通过离子交换层析分离得到纯度≥95%之单修饰的聚乙二醇干扰素，将所述单修饰的聚乙二醇干扰素通过切向流超滤进行置换缓冲系统的处理，将其置换于磷酸钠缓冲液中，最终得到聚乙二醇干扰素蛋白。

2.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，在所述步骤A之前还包括：将重组干扰素原液通过切向流超滤系统浓缩至蛋白浓度为2.0 -10.0 mg/ml，再用50mM的硼酸盐缓冲液渗滤，得到所述重组人干扰素浓缩液。

3.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤A具体的包括：

将所述活化聚乙二醇溶解于冷却至2℃-8℃的乙腈溶液中，使其终浓度为40-80 mg/ml，使所述活化聚乙二醇的量为所述重组人干扰素浓缩液蛋白总量的2-8倍；所述偶联反应在碱性条件下进行。

4.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤B具体的包括：以2-6倍的醋酸钠缓冲液平衡上样后的离子交换层析柱，再以含20 mM -80mM氯化钠的醋酸钠缓冲液洗脱，根据紫外检测仪分段收集洗脱峰，以SDS-PAGE电泳法检测纯度，得到纯度≥95%之单修饰的聚乙二醇干扰。