[发明专利]一种测定Kappa游离轻链浓度的试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种测定Kappa游离轻链浓度的试剂盒及方法。

背景技术

免疫球蛋白（Ig）轻链分为κ（kappa）和λ（lambda）2个型别，每个Ig分子上只有一个型别的轻链，人类κ（kappa）和λ（lambda）的比例为6：4。轻链为能自由通过肾小球基底膜的小分子蛋白质，在肾小管被重吸收回到血液循环中，所以正常人尿中只有少量轻链存在。当人体发生代谢失调和多发性骨髓瘤时，血液中出现大量游离轻链，并由尿中排出，即为Bence-Jones蛋白（本周蛋白）。在正常人体内，血清κ型游离轻链为3～19mg/L，λ型游离轻链为6～26mg/L，κ/λ比值为0.26～1.65。异常情况的κ型游离轻链以及和κ/λ比值、或异常λ型游离轻链和κ/λ比值、或同时三者均异常等情况，对单克隆性γ球蛋白增多症（monoclonal gammopathies,MGP）的敏感性为88%～98%；对非分泌性骨髓瘤（nonsecretory myeloma,NSM）的敏感性为65%～70%，有助于单克隆轻链病、AL-淀粉样变的早期诊断，也可用于化疗或自身外周血干细胞移植后是否复发的监测，如果化疗或移植效果好，则病患血清κ型游离轻链、λ型游离轻链以及κ/λ比值均在正常水平或相比治疗前有明显改善。

胶乳增强比浊方法可在全自动生化仪上测定κ型游离轻链，速度快、通量高。对于游离轻链的测定，国内目前主要使用英国Binding site公司的Freelite系列测定试剂，可以通过胶乳增强比浊方法测定Kappa游离轻链；但在临床应用中，Freelite系列试剂存在大量的临床标本稀释不成线性问题，这些标本测定结果明显不符合临床症状，目前在国内医院推广应用很有限。（注：稀释成线性是指按照一定比例手工使用生理盐水稀释临床标本，测定稀释后标本的结果应该与按照原始浓度和稀释比例计算的理论结果偏差在正负20%以内。线性也为体外诊断试剂的注册基本要求之一，通常稀释不成线性的标本结果是不可靠的。造成线性问题的主要原因有试剂配方抗血液成分干扰问题、抗体特异性问题等等。）

同时，发明人使用按照常规方式制备的Kappa游离轻链试剂，在未使用该特殊发明方法时也出现与Freelite试剂类似的临床标本稀释不成线性问题情况；由于不论是Freelite系列Kappa游离轻链测定试剂还是发明人自行制备的Kappa游离轻链试剂，均存在临床标本稀释不成线性问题，因此，可以认为临床标本稀释是否成线性是Kappa游离轻链比浊测定试剂盒制备中一大共同难点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于为了克服现有的Kappa游离轻链测定不成线性的缺陷，提供了一种测定Kappa游离轻链浓度的试剂盒及方法。本发明的测定方法可以得到可靠的Kappa游离轻链测定结果。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：

本发明提供了一种采用胶乳增强比浊方法测定Kappa游离轻链浓度的试剂盒，其包括反应缓冲液（R1试剂）和Kappa游离轻链抗体溶液（R2试剂），其特征在于，所述的反应缓冲液中氯化钠的浓度为1250～2400mmol/L。

其中，所述的Kappa游离轻链抗体溶液中的Kappa游离轻链抗体较佳地为兔抗人多克隆Kappa游离轻链抗体，更佳地为Dako公司的兔抗人多克隆Kappa游离轻链抗体（即Dako公司的Polyclonal Rabbit Anti-Human Kappa Free Light Chains，货号为A0100）。

较佳地，当反应缓冲液的组成为4-羟乙基哌嗪乙磺酸（Hepes）100mmol/L、氯化钠1250～2400mmol/L、吐温-201ml/L和防腐剂Proclin-3000.3ml/L时，Kappa游离轻链抗体溶液的组成为Dako公司的兔抗人多克隆Kappa游离轻链抗体（货号为A0100）0.5mg/ml、胶乳微球3mg/ml、吐温-201ml/L和防腐剂Proclin-3000.3ml/L。上述组成中，胶乳微球可购于国际知名胶乳供应商，如Bangslab公司或JSR公司。