[发明专利]一种重楼药材多指标快速检测方法

说明书

技术领域

本发明属于近红外检测领域，具体涉及一种重楼药材多指标快速检测方法。

背景技术

    中药重楼为百合科植物云南重楼Paris polyphylla Smith Var.yunnanensis (Franch.) Hand.-Mazz.或七叶一枝花Prais polyphylla Smith Var.chinensis (Franch.)Hara的干燥根茎，其主要化学成分为甾体皂苷，并含有β-蜕皮激素、多糖、黄酮苷及氨基酸，具有较强的生理和药理活性，包括抗肿瘤、止血止痛、抑菌消炎、免疫调节等作用，广泛应用于临床。

原药材检查是过程质量分析和控制的源头。由于地理位置、气候条件、生长环境等因素差异，不同产地的同一类药材在活性成分的含量和种类上往往差异较大，因此对原药材进行质量评价十分必要。重楼药材中含有重楼皂苷-I、重楼皂苷-II、重楼皂苷-VII等多种化合物，化学成分复杂，而且水分的存在可能影响这些有效成分的药效，影响药材的稳定性，影响生产成本等。目前，对原药材的质量控制主要依靠传统质量分析方法，耗时费力，故研究开发一种重楼药材多指标快速检测方法，具有现场药材筛选和质量全面评价的应用前景。

近红外光谱（NIR）技术是一种间接分析技术，是通过定标模型的建立来实现对未知样本的定性或定量分析，具有快速、无损、原位与无污染等特点。近年来，近红外分析技术作为一种间接分析技术，已应用于中药质量控制及生产应用领域中，包括药材、复方中药和中药各种剂型的定性定量，以及利用光纤探头技术实现对中药生产工艺的在线连续监控等。

《川滇地区重楼商品药材质量评价》（尹鸿翔等，《中药材》，2007年7月第30卷第7期，p771-774），虽公开了高效液相色谱法的条件，但其参数与本专利中参数差异较大。此外，将近红外分析技术用于重楼药材中关键质控指标的含量测定国内外均无此方面的应用报道，因此研究一种方法来快速检测重楼药材中各关键质控指标是非常有必要的，有助于提高中药产品的稳定性、安全性和有效性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重楼药材多指标快速检测方法。采用近红外分析技术能够快速测定重楼药材中重楼皂苷-I、重楼皂苷-II、重楼皂苷-VII、总皂苷和水分的含量，实现原药材质量的快速评价。

本发明的目的是通过以下技术方案实现： 

（1）重楼药材样品的收集；

收集不同批次且具有代表性的重楼药材不少于80批，随机选择其中19~30个的样品作为验证集，其余样品作为校正集进行定量校正模型的建立。

（2）用传统方法测定各关键质控指标：

重楼药材中各关键质控指标包括：重楼皂苷-I、重楼皂苷-II、重楼皂苷-VII、总皂苷和水分；

将样品经预处理后采用液相色谱法测定重楼皂苷-I、重楼皂苷-II、重楼皂苷-VII的含量，总皂苷含量为以上三种皂苷的总和；使用烘干称重法测定水分含量。

样品预处理方法：将重楼药材打粉，过80目筛，取细粉约0.5 g，精密称定，置平底烧瓶中，精确加入甲醇10 mL，称定质量，超声波提取45 min，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，离心10 min（转速为13000 rp·min^-1），取上清液用于高效液相色谱分析。

高效液相色谱法条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脱0~25 min：25~95%A，25~30 min：95%A；检测波长203 nm；流速：1.0 mL·min^-1；柱温：30℃；进样量：10 μL；理论板数按重楼皂苷-I峰计算应不低于4000。

烘干称重法为：将重楼药材打粉，过80目筛，精密称取重楼粉末2 mg于干燥恒重的扁形瓶中，置烘箱内100-105℃干燥5 h，移至干燥器中冷却30 min，精密称定，再在上述温度下干燥1 h，冷却，称重，至连续两次差不超过5 mg，计算水分含量。

（3）采集样品的近红外光谱图：

分别使用漫反射采样器件采集步骤（1）所述的校正集和验证集样品的近红外光谱，采样次数为32次，分辨率为8 cm^-1，以仪器内置背景为参比，扫描光谱范围为4000~10000 cm^-1，每个样品扫描重复3次，取平均光谱作为样品光谱；

（4）定量模型的建立：