[发明专利]包括3334G>A突变的CYP2D6基因片段、所编码的蛋白质片段及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物学领域，涉及CYP2D6等位基因第3334位的单碱基突变。更具体地，本发明涉及包含该突变位点的核酸片段及其相应编码的蛋白质片段、鉴定所述突变位点的试剂、检测方法和鉴定该位点在指导用药中的应用。

背景技术

细胞色素P4502D6（CYP2D6）是CYP酶家族重要的成员之一。其基因位于第22号染色体上，包括9个外显子，基因全长9432bp（GenBank注册号M33388，外显子区位于第1620-5909位）。人体内该细胞色素的量只占肝脏酶总量的2%～4%，却参与临床上20%～30%药物的代谢，这样药物包括抗抑郁药、抗心律失常药、抗精神病药、镇痛药、止咳药、止吐药、抗糖尿病药及β受体阻滞药等，研究其代谢多态性具有十分重要的临床应用价值（参见参考文献1）。

CYP2D6基因具有高度多态性。目前为止，NCBI SNP数据库中已经收录了超过300个突变位点。由CYP450国际命名委员命名的等位基因也已有150多个，另外还有多种新发现的突变型尚未被命名（http://www.cypalleles.ki.se/cyp2d6.htm）。每个等位基因都不同程度涉及点突变、缺失、插入、重排等，从而影响CYP2D6的活性，进而影响对药物的代谢活性，产生不同程度的药物效应。除去野生型CYP2D6^*1外，目前研究较多且临床意义较大的突变型主要包括以下7种：CYP2D6^*2、^*3、^*4、^*5、^*10、^*17、^*41，其中人种分布最广、研究最多、中国人群研究资料相对最丰富的突变型是CYP2D6^*2（2850C>T；4180G>C）和CYP2D6^*10（100C>T；4180G>C）（参见参考文献1、2、3）。

根据目前的临床研究显示，CYP2D6基因的这种多态性是造成CYP2D6酶活性在个体之间差异显著的主要原因，携带不同CYP2D6基因型的个体间可引起药物疗效的极大差异，甚至产生严重的药物毒副作用或治疗不充分。因此，研究CYP2D6基因多态性对药物疗效的影响将对临床合理用药提供重要的科学依据（参见参考文献3、4）。

发明内容

本发明的目的是提供CYP2D6基因的新的单碱基突变位点，包含该突变位点的核酸片段、其编码的蛋白质片段及鉴定该突变位点在用药指导中的应用。

本发明的第一个方面是提供核酸片段，所述核酸片段包含对应于SEQ ID NO.1的第3334位的突变位点，且是SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列中的至少10个连续核苷酸，其中第3334位的核苷酸是A；或者所述核酸片段包含对应于SEQ ID NO.2的第1163位的突变位点，且是SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列中的至少10个连续核苷酸，其中第1163位的核苷酸是A；或者所述核酸片段为上述核酸片段的反向互补序列。

本发明的第二个方面是提供与含有对应于SEQ ID NO.1的第3334位或对应于SEQ ID NO.2的第1163位的突变位点的等位基因片段或其反向互补序列全部或部分杂交的等位基因特异性寡核苷酸，其中SEQ ID NO.1的第3334位或SEQ ID NO.2的第1163位的突变位点的核苷酸是A；所述等位基因片段是SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列中的至少10个连续核苷酸或其反向互补序列。

本发明的第三个方面是提供用于检测和/或分析本发明的单碱基突变的试剂盒，所述试剂盒包含本发明的核酸片段或等位基因特异性寡核苷酸，或包含能够作为引物扩增所述单碱基突变但不包含该单碱基的核酸片段；所述单碱基对应于SEQ ID NO.1的第3334位或SEQ ID NO.2的第1163位。

本发明的第四个方面是提供本发明的核酸片段或寡核苷酸在检测CYP2D6基因突变中的应用，其中所述核酸片段或寡核苷酸用作探针或引物；或者本发明的核酸片段或寡核苷酸用于制备检测CYP2D6基因突变的药物的应用；或者本发明的核酸片段或寡核苷酸用作检测CYP2D6基因突变的检验标志物的应用。

本发明的第五个方面是提供一种用药指导，包括检测待测样品中CYP2D6基因的对应于SEQ ID NO.1的第3334位或SEQ ID NO.2的第1163位的单碱基突变；根据检测到的突变，调整由CYP2D6代谢的药物的给药量。