[发明专利]一种基于PAMAM的自组装纳米基因载体复合物及其制备方法

权利要求书

1.一种基于PAMAM的自组装纳米基因载体复合物，其特征在于该基因载体复合物是由HA、PAMAM和gene通过相互静电作用自组装组成的复合体系，表示为HA/PAMAM/gene，其中PAMAM选自不同代数的聚酰胺-胺树状大分子，HA选自不同分子量的透明质酸及其钠盐，gene选自治疗性基因药物。

2.根据权利要求1所述的一种基于PAMAM的自组装纳米基因载体复合物，其特征在于：所述基因载体复合物中的PAMAM与治疗性基因药物的正负电荷比为24:1～10:1；PAMAM与HA的正负电荷比为1:0.05～1:1。

3.根据权利要求1所述的一种基于PAMAM的自组装纳米基因载体复合物，其特征在于：所述PAMAM是末端带有氨基，以乙二胺为核的3.0、4.0、5.0或6.0代的聚酰胺-胺树状大分子。

4.根据权利要求1所述的一种基于PAMAM的自组装纳米基因载体复合物，其特征在于：所述治疗性基因药物是指siRNA和DNA。

5.根据权利要求1所述的一种基于PAMAM的自组装纳米基因载体复合物，其特征在于：所述透明质酸及其钠盐的分子量范围为5000Da-200000Da。

6.如权利要求1～5中任意一项所述的基于PAMAM的自组装纳米基因载体复合物的制备方法，其特征在于包括下述步骤：

（1）将PAMAM的水溶液与gene的水溶液混合孵育，通过静电吸附作用形成PAMAM/gene的复合物；

（2）向步骤（1）得到的PAMAM/gene的复合物中加入HA溶液，室温孵育通过静电吸附作用自组装形成HA/PAMAM/gene三元复合物；

其中PAMAM选自不同代数的聚酰胺-胺树状大分子，HA选自不同分子量的透明质酸及其钠盐，gene选自治疗性基因药物。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于所述步骤（1）中所述PAMAM的水溶液由下述方法配制而成：

（1）将PAMAM干燥，除去甲醇溶剂后，再用PH=7.4的PBS缓冲液溶解，制备成5-20mg/mL储存液；

（2）将步骤（1）制成的储存液溶解于DEPC水中，振荡混匀，配制成1-2mg/mL的所述PAMAM的水溶液。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于所述步骤（1）中所述gene的水溶液由下述方法配制而成：

将所述gene溶于DEPC水中，震荡摇匀，配制成0.1-0.2mg/mL的所述的gene的水溶液。

9.根据权利要求6或7或8所述的制备方法，其特征在于所述步骤（1）的涡旋孵育中，将所述PAMAM水溶液，gene水溶液和opti-MEM培养基以1：1：25的体积比混合，混匀后置室温孵育20-30min形成所述PAMAM/gene复合物。

10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于所述步骤（2）中将HA先用PH=7.4的PBS缓冲液溶解，配制成浓度为1-5mg/mL的HA溶液，再依次稀释至0.1-1mg/mL溶液，取HA溶液以1:1的体积比加入到步骤（1）得到的PAMAM/gene复合物中，混匀后置室温孵育20-30min自组装形成HA/PAMAM/gene复合物。