[发明专利]一种提高百合多糖活性的酶法修饰制备方法

权利要求书

1.一种提高百合多糖活性的生物修饰制备方法，其特征在于采用复合酶(β-甘露聚糖酶和β-葡聚糖酶)法对百合多糖(403.3kDa)进行生物修饰(即酶法可控降解)，通过反应条件控制，获得系列高免疫活性百合多糖修饰产物。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于复合酶的作用条件为：底物百合多糖浓度30～40g/L；β-甘露聚糖酶浓度500～900U/L，β-葡聚糖酶250～450U/L；pH5.5～6.5(PBS缓冲液)；温度40～55℃；时间0.5～1.0h。

3.根据权利要求1～2所述的方法，在复合酶中，β-甘露聚糖酶和β-葡聚糖酶用量比为2∶1(U/U)。

4.根据权利要求1～3所述的方法，其特征在于反应结束后去除酶及产物分离制备方法为：反应结束后，将溶液加热至100℃，保温5min，而后离心(6000rpm)去除酶蛋白，将上清液放入透析袋(截留分子量为5.0kDa)内透析(4℃，12h)，透析结束后将样品离心(5000rpm)，取上清液冷冻干燥，即可获得白色粉末状百合多糖修饰产物，百合多糖修饰产物的分子量范围是8.0kDa～70.0kDa。

5.根据权利要求1～4所述的方法，其特征在于采用体外巨噬细胞RAW264.7模型研究百合多糖及修饰产物体外免疫调节活性，修饰后的百合多糖活性显著提高，与底物相比，对巨噬细胞增殖活性增加40.5～77.2％。百合多糖的分子量过高或过低，其活性都较低。

6.根据权利要求1～5所述的方法，其特征在于百合多糖、β-甘露聚糖酶和β-葡聚糖酶，pH，温度及作用时间优选组合为35g/L、800U/L和400U/L、6.0(PBS缓冲液)、50℃和45min。在此作用条件下，百合多糖修饰产物的分子量为30.5kDa。与底物百合多糖相比，对巨噬细胞增殖活性增加77.2％。