[发明专利]一种与磷酸酶反应产生化学发光的化合物、组合物和新型制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种与磷酸酶反应产生化学发光的化合物、组合物和新型工艺，属于化合物、组合物及其制备方法的技术领域。

背景技术

碱性磷酸酯酶等水解酶经常在生物分子和药物、激素、类固醇以及肿瘤标记物等其他重要待分析物的酶联检测中用作标记物。并且，磷酸酶如碱性磷酸酶(AP)和酸性磷酸酶(AcP)在医学诊断中具有重要的临床意义。为了安全、方便且灵敏地检测这些酶，已公开了如化学发光法以定量测定样品中酶量或者酶标记的待分析物量或标记的待分析物的特异结合对象的量。

二氢吖啶类化合物已知具有和磷酸(酯)酶反应并发光的能力，因此其可用于检测磷酸酶、免疫测以及用磷酸酶标记测定待分析物的方法测定酶联核酸、抗体、半抗原和抗原。此类化合物已记载于例如公开号为CN1312252A的中国专利申请中，其全文以引用的方式结合入本文之中。上述二氢吖啶类化合物的一个实例为下化合物J，其化学名为((4-氯苯基)硫代)(10-甲基吖啶-9(10H)-亚基)甲基磷酸二钠：

通常，化合物J可以由如下化合物I制备得到：

发明内容

本发明提供化合物I的制备方法，在与现有技术方法类似的情形下，优化反应条件，从而提高反应产率和纯度，而发明人同时发现，当对现有技术的反应条件进行简化时，反应产率和纯度得到很大提高，且反应时间大大缩短。此外，采用本发明的方法，其制备工艺简便，产率增加，可以在产业上应用。

一种化合物I的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

其中，步骤3至7可彼此独立地优选以如下的方法进行：

步骤3：化合物D与氯化剂反应以制备化合物E，其中所述氯化剂优选为二氯亚砜、三氯化磷和三氯氧磷中的一种或多种，反应溶剂优选甲苯、苯、二氯甲烷、三氯甲烷和四氯化碳中的一种或多种；

化合物D与氯化剂的摩尔比可以为约1:1至约1:5，优选约1:1至约1:3，例如约1:2；

反应温度可以为室温至回流温度，优选回流温度；

反应时间可以为约1至约48小时，优选约10至约24小时，特别优选约10至约15小时，例如12小时；

反应优选在催化剂如N,N-二甲基甲酰胺的存在下进行；

优选将氯化剂滴加至化合物D的溶液中；

优选地，步骤3的产品不经纯化直接进行下一步。

步骤4：化合物E在碱的存在下与4-氯苯硫酚反应以制备化合物F，其中所述碱可以为无机碱或有机碱，优选为氢氧化钾、氢氧化钠、吡啶、三乙胺和LDA中的一种或多种，反应溶剂优选为甲苯、苯、二氯甲烷、三氯甲烷和四氯化碳中的一种或多种；

其中化合物D与4-氯苯硫酚的摩尔比可以为约1:1至约1:5，优选约1:1至约1:4，特别优选约1:1至约1:3，极特别优选约1:2至约1:2.2；

优选将碱滴加至包含化合物E和4-氯苯硫酚的溶液中。

步骤5：化合物F进行还原反应以制备化合物G，所述还原反应优选在锌粉-酸体系或催化加氢体系的存在下进行，所述酸优选盐酸、甲酸和乙酸中的一种或多种，并且反应溶剂优选为甲苯、苯、二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲基叔丁基醚和乙基叔丁基醚中的一种或多种。

步骤6：化合物G与甲基化试剂反应以制备化合物H，所述甲基化试剂优选为碘甲烷、三氟甲磺酸甲酯和/或硫酸二甲酯，反应溶剂优选为甲苯、苯、二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲酸甲酯、甲酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、甲基叔丁基醚和乙基叔丁基醚中的一种或多种；

化合物G与甲基化试剂的摩尔比可以为约1:1至约1:5，优选约1:1.5至约1::4，特别优选约1:2至约1:3，例如约1:2.5；

如果合适，反应也可以在碱的存在下进行，所述碱例如LDA或NaH等；

反应温度可以为-10℃至回流温度，优选-5℃至回流温度，例如0℃至回流温度；

反应时间可以为约1至约60小时，优选约2至约48小时，例如约2小时、约12小时或约36小时。

步骤7：化合物H在碱的存在下与三氯氧磷及3-羟基丙腈反应以制备化合物I，其中所述碱可以为无机碱或有机碱，优选为氢氧化钾、氢氧化钠、LDA、吡啶和三乙胺中的一种或多种，反应溶剂优选为四氢呋喃；