[发明专利]hTERT诱导构建先天性心脏病房间隔缺损细胞模型及其细胞库

说明书

技术领域

本发明涉及hTERT(端粒酶逆转录酶催化亚基)诱导(介导)构建先天性心脏病房间隔缺损细胞模型及其细胞库，主要用于新生儿出生缺陷干预研究领域，为先天性心脏病房间隔缺损的体外研究提供细胞模型并保存其科研资源。

背景技术

先天性心脏病房间隔缺损是发病率最高的出生缺陷之一，已成为严重的社会问题。我国每年新发先天性心脏病11.2万-16.0万例，将造成经济损失109亿-156亿；先天性心脏病的治疗费每年高达120亿元，给社会和家庭造成了严重的心理负担和精神痛苦，已严重影响我国的人口质量，已成为社会发展的沉重负担和可持续发展的严重障碍。

先天性心脏病等出生缺陷的研究及干预已成为我国政府行为，党中央《决定》自2006年开始实施“出生缺陷干预工程”；中华人民共和国主席令《1994年10月27日第三十三号》公布我国自1995年6月1日起施行(出生缺陷)产前诊断的有关法规标准；全国人民代表大会相继颁布了《中华人民共和国母婴保健法》、《中华人民共和国母婴保健法实施办法》等一系列法规，促进了出生缺陷产前诊断、干预工作的开展；在《国民经济和社会发展的第十一个五年规划纲要》中强调加大出生缺陷干预力度，改善出生人口素质；在《国家中长期科学和技术发展规划纲要(2006-2020年)》中将出生缺陷的研究列为优先主题。

目前认为先天性心脏病房间隔缺损是遗传和环境因素等复杂关系相互作用的结果，主要包括①.胎儿发育的环境因素：如妊娠前三个月患病毒或细菌感染尤其是风疹病毒，其次是柯萨奇病毒，其出生的婴儿先天性心脏病的发病率较高。其它如羊膜的病变，胎儿受压，妊娠早期先兆流产，母体营养不良、糖尿病、苯酮尿、高血钙，放射线和细胞毒性药物在妊娠早期的应用，母亲年龄过大等均有使胎儿发生先天性心脏病的可能。②遗传因素：多数的先天性心脏病是由多个基因与环境因素相互作用所形成。③其他因素：与地区、性别也有关系。

近年来，对先天性心脏病等出生缺陷的研究主要是针对遗传、生物、物理、化学因素与发病(率)的关系进行流行病学方面的调查研究。但是，由于没有可在体外长期培养的、可用于先天性心脏病发病机制研究的永生细胞模型及其细胞库，就难以从细胞水平在体外研究先天性心脏病房间隔缺损细胞受物理、化学、生物、遗传等影响的基因突变、基因表达、功能改变、生理特性、生物传导等机制，从而严重限制了先天性心脏病房间隔缺损的进一步研究。

国外文献报道，猴肾病毒40(SV40)可以使某些人类细胞发生永生化。Poulin DL、Kung AL和Sullivan CS等研究表明，SV40T抗原基因的导入能加快转化细胞的生长速率，永生化细胞在体外多次传代后，仍具有相对稳定的增殖特性和功能状态，同时也能保留其原始细胞的许多分化表型，可以用于转基因动物模型及人类和动物某些种类的细胞模型的建立，据此可以借助于研究转基因永生化细胞及动物模型而在体外研究原始细胞的特性，从而研究其发病机制。

但最近有研究发现，SV40Tag转染的细胞伴随着DNA损伤修复机制的丢失、核型的不稳定性以及少数细胞致瘤性转化。此外，长期体外培养发现部分转染SV40Tag的细胞只是延长了寿命，或仅仅渡过了衰老期(MI期)，多数细胞会最终进入危机期(M2期)而死亡，说明细胞并未获得永生化。同时SV40病毒具有致瘤性，与某些肿瘤的发生、发展有关，因此SV40Tag转染的细胞对某些研究也存在一定程度的限制性。

国外研究表明，导入外源性hTERT可以使细胞保持正常表型及分化特征。近年来已利用hTERT成功建立了某些细胞的永生化细胞系，基本保持染色体稳定、分化正常、接触抑制、无致瘤性等相对“正常”的生长特征。可以用于人类和动物某些种类的细胞模型的建立，对借助于研究转基因永生化细胞模型而研究原始细胞的特性，从而研究其发病机制，具有重要的意义。