[发明专利]黄芩素分子印迹聚合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及一种分子印迹聚合物的制备方法，特别是一种对黄芩素及其体内代谢物具有特异性识别的分子印迹聚合物的制备方法。

背景技术

黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi.的干燥根，具有抗炎、抗病毒、抗变态反应、抗氧化、抗肿瘤等广泛的药理作用，是我国常用中药材之一。黄芩素是黄芩的主要有效成分之一，对多种疾病包括炎症、肿瘤、纤维化性疾病、心脑血管性疾病以及神经性疾病具有良好的防治作用。目前对于黄芩素的提取大多应用有机溶剂提取或树脂吸附，存在着前处理步骤繁琐，有机溶剂消耗量大，环境污染，且选择性差，富集容量低，提取率极低。因此，随着黄芩素研究的不断深入，迫切需要一种对黄芩中有效成分更为简便实用，且高灵敏度的专一的现代分离检测方法。

分子印迹技术是模仿“抗原-抗体”识别原理发展的一种特异性识别目标分子的技术。由于分子印迹聚合物兼有高效、稳定和特异选择性且合成价格低廉的特点，近年来在越来越多的领域广泛应用，并取得良好效果。有文献报道【杨清清，李娟，等.药物分析杂志，2011，31(1)】以原位聚合法合成黄芩素分子印迹整体柱，并对黄芩素和汉黄芩素进行了分离。此方法以原位聚合法引入分子印迹技术，直接在HPLC柱内制备连续棒形聚合物，制备过程简单。但是聚合物颗粒不均匀，单分散性差，大量印记位点位于材料内部，大大降低了聚合物的吸附效率和亲和力。

中国专利CN103102444A公开了一种金属配位黄芩素分子印迹聚合物的制备方法，采用辐射聚合和分子印迹技术相结合，一改过去传统的本体聚合方法，节省时间。但是合成的聚合物需要碾磨过筛，大量印记位点被破坏，而且颗粒单分散性和均匀度均较差。同时存在后处理较繁琐的缺点。所以制备均一单分散的分子印迹聚合物，并与固相萃取相结合来分离提纯黄芩提取物的研究，具有广阔的应用前景和研究意义。

发明内容

解决的技术问题：本发明的目的在于提供一种黄芩素分子印迹聚合物及其制备方法和应用，以黄芩素分子印迹聚合物为新型分离吸附材料，并与固相萃取相结合，从黄芩提取物中定向高效的分离、富集、纯化黄芩素的方法，从而克服现有分离纯化技术的不足，使其能够简单、快速、特异性地吸附黄芩素分子或其结构类似物，实现对黄芩药材及生物代谢样品中化学成分的选择性分离、高效富集。

技术方案：黄芩素分子印迹聚合物，由黄芩素、功能单体混合溶解在致孔剂中，静置2h，形成黄芩素－功能单体复合物，再加入有效剂量的引发剂、交联剂，超声5～10min，混合均匀，其中：黄芩素、功能单体的摩尔比为1:4～1:8，功能单体与交联剂的摩尔比为1:3～1:6；致孔剂体积用量与交联剂摩尔比为5～10:1（mL/mmol）；引发剂的用量是黄芩素、功能单体和交联剂总质量的3%～5%；将上步所得的混合溶液通入氮气10min，密封；在氮气保护下，分子印迹聚合物采用热引发，置于振荡培养箱中进行聚合反应，其中转速为100～200r/min，聚合温度为50～70℃，聚合反应时间为20～36小时；聚合反应结束后，所得到的分子印迹聚合物用有机溶剂进行洗脱，除去模板分子，直至洗脱液中检测不出模板分子后，再用甲醇洗至中性，最后将分子印迹聚合物45℃真空干燥24h而得。

一种黄芩素分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于制备步骤为：1）将黄芩素、功能单体混合溶解在致孔剂中，静置2h，形成黄芩素－功能单体复合物，再加入有效剂量的引发剂、交联剂，超声5～10min，混合均匀，其中：a.黄芩素、功能单体的摩尔比为1:4～1:8，功能单体与交联剂的摩尔比为1:3～1:6；b.致孔剂体积用量与交联剂摩尔比为5～10:1（mL/mmol）；c.引发剂的用量是黄芩素、功能单体和交联剂总质量的3%～5%；2）将步骤1）中所得的混合溶液通入氮气10min，密封；3）在氮气保护下，分子印迹聚合物采用热引发，置于振荡培养箱中进行聚合反应，其中转速为100～200r/min，聚合温度为50～70℃，聚合反应时间为20～36小时；4）聚合反应结束后，所得到的分子印迹聚合物用有机溶剂进行洗脱，除去模板分子，直至洗脱液中检测不出模板分子后，再用甲醇洗至中性，最后将分子印迹聚合物45℃真空干燥24h。

所述的功能单体为：丙烯酸类：丙烯酸、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯或三氟甲基丙烯酸；酰胺类：丙烯酰胺或甲基丙烯酰胺；吡啶类：2-乙烯基吡啶或4-乙烯基吡啶。

所述的引发剂为过氧化苯甲酰或偶氮二异丁腈。

所述的致孔剂为四氢呋喃、乙腈、氯仿或二氯甲烷。