[发明专利]一种重组的菲律宾蛤仔肿瘤坏死因子RpTNF及其构建和应用

权利要求书

1.一种重组的菲律宾蛤仔肿瘤坏死因子RpTNF，其特征在于：重组的菲律宾蛤仔肿瘤坏死因子RpTNF的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1中所示。

2.按权利要求1所述的重组的菲律宾蛤仔肿瘤坏死因子RpTNF的构建方法，其特征在于：

通过表面展示技术将菲律宾蛤仔肿瘤坏死因子（RpTNF）展示于解脂耶罗威亚酵母（Yarrowia lipolytica）上，即得到具有序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列的重组蛋白RpTNF菌株。

3.按权利要求2所述的重组的菲律宾蛤仔肿瘤坏死因子RpTNF的构建方法，其特征在于：

所述表面展示过程为：

1）以菲律宾蛤仔肿瘤坏死因子（RpTNF）编码区为模板，采用P1和P2为引物进行PCR扩增，待用；

2）PCR扩增产物与pMD18-T载体通过T4连接酶连接，而后将连接产物与经HindIII，BamHI双酶切后表面展示载体连接；

3）将上述构建连接载体转入解脂耶罗维亚菌株中进行诱导培养，经免疫荧光检测，即得到具有序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列的重组蛋白RpTNF菌株；

所述引物分别P1(5’-CGCAAGCTTCTCACTGGAAAGGAACAAC-3’)和P2（5’-CGCGGATCCGTGGTGGTGGTGGTGGTGAAAATAATTGTCCCTTGTGTA-3’）。

4.按权利要求1所述的重组的菲律宾蛤仔肿瘤坏死因子RpTNF的应用，其特征在于：所述重组的菲律宾蛤仔肿瘤坏死因子RpTNF可作为抗弧菌感染的免疫增强剂。

5.按权利要求4所述的重组的菲律宾蛤仔肿瘤坏死因子RpTNF的应用，其特征在于：所述重组的菲律宾蛤仔肿瘤坏死因子RpTNF可作为提高菲律宾蛤仔存活率的免疫增强剂。