[发明专利]采用EST-SSR标记进行花椰菜品种鉴定的方法

权利要求书

1.用于花椰菜品种鉴定的EST-SSR引物，其特征在于，包括5对EST-SSR引物：

HYC33上游引物序列：5'-AGACTTCGTCGATCCACCTG-3’，HYC33下游引物序列：5'-GACCTCGTCCTCCTCTTCCT-3’BC5上游引物序列：5'-CAAGAGTCCAAAAGCCGAAC-3’，BC5下游引物序列：5’-CCTTGCTTGCATCAGTTTCA-3’；HYC10上游引物序列：5’-CATGAAAGGCGAAGAGAAGC-3’，HYC10下游引物序列：5'-ACACACCCAAGGCTTGTAGG-3’；BC20上游引物序列：5’-CCACCATCGCTTCTCAGATT-3’，BC20下游引物序列：5'-GTCTCGTCAGGCCTCTTTTG-3’；BC28上游引物序列：5'-TAACTTCTCCCCCGTCCTCT-3’，BC28下游引物序列：5'-GAGATGGCTACAGTGGCTCC-3’。

2.一种采用EST-SSR标记进行花椰菜品种鉴定的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)采用权利要求1所述的EST-SSR引物对供试品种样品模板DNA进行PCR扩增，其中的PCR扩增反应的总体积为10μL，扩增反应体系为：2×Master Mixes5μL，上游和下游引物10μmol/L各0.25μL，供试品种花椰菜杂交种基因组DNA模板，浓度100ng/μL，1μL，双蒸水补足10μL；PCR反应程序为95℃预变性2min；32个扩增循环，94℃40sec，56℃45sec，72℃1min；72℃延伸7min，4℃保存；

(2)对PCR扩增产物进行凝胶电泳，非变性聚丙烯酰胺凝胶浓度为8％，凝胶组分为：去离子水21mL，10×TBE3mL，40％PAG6mL，TEMED30μL，10％过流酰胺300μL；设定电压250V，电泳1h，关闭电源，进行染色；染色过程：银染8～10min，迅速水洗，NaOH显色数分钟，直至条带清晰即可，再次水洗；

(3)通过分析EST-SSR结果，比较13份花椰菜品种间多态性位点的差异，确定引物的多态率及多态信息量；在相同迁移率位置上进行“1，0”标注，构建13份花椰菜品种的SSR分析谱带数据，通过数据分析5对引物是否可对13份花椰菜品种进行完全的区分，同时构建13份花椰菜品种的指纹图谱。