[发明专利]一种发光细菌冻干制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种发光细菌冻干制剂的制备方法，其特征在于，包括步骤：

a.提供一含发光细菌和保护剂的液态混合物；

b.将所述的混合物降温至第一温度区间T1并在第一温度区间维持一段时间P1，从而形成降温后的混合物，其中所述的第一温度区间T1为-100～-60℃；P1为0.2～10小时；

c.将所述降温后的混合物从第一温度区间T1升温至第二温度区间T2，并在第二温度区间维持一段时间P2，从而形成升温后混合物，所述的第二温度区间T2为-55～-30℃；P2为0.2～24小时；

d.将所述的升温后的混合物升温从第二温度区间分阶段上升至第三温度区间T3并维持一段时间P3，从而形成休眠混合物，所述的第三温度区间T3为-5～0℃，且P3为1～72小时；其中所述分阶段包括两阶段或三阶段，每阶段将所述的混合物升温至一个或多个亚温度区间S，所述的亚温度区间选自下组：-25±2℃、-20±2℃、-15±2℃、-10±2℃，升温速率为2-10℃/min，在各亚温度区间的维持时间为5-60min；和

e.将所述的休眠混合物进行干燥，从而形成发光细菌的冻干制剂；

其中，步骤a中所述的保护剂包括奶粉、海藻糖。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的降温速率为1-5℃/min。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤b中，所述的降温时间为0.25－2小时。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤b中，所述的降温是将0～40℃液态混合物降至第一温度区间T1。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的分阶段为两阶段，每阶段维持时间为15分钟。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述升温的速率为3-8℃/min。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还具有选自下组的一个或多个特征：

从第一温度区间T1升温至第二温度区间T2的升温速率为1-6℃/min；

从第一温度区间T1升温至第二温度区间T2的升温时间为5-30分钟；

从第二温度区间T2升温至第三温度区间T3的升温速率为1-6℃/min；

从第二温度区间T2升温至第三温度区间T3的升温时间为5-30分钟。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的发光细菌是选自以下属的发光细菌：弧菌属(Vibrio)、发光杆菌属(Photobacterium)、光杆菌属(Photorhabdus)。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的发光细菌是青海弧菌或其衍生菌。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤e中，所述的干燥为真空干燥。

11.一种发光细菌的冻干制剂，其特征在于，所述的冻干制剂由权利要求1-10任一所述的方法制备获得，且经复苏后，发光细菌的存活半衰期T_1/2≥6小时,且所述发光细菌冻干制剂精密度cv值小于10％。

12.一种发光细菌的冻干制剂，其特征在于，所述的冻干制剂由权利要求1-10任一所述的方法制备获得，且发光细菌的发光计数值在40万光子数以上,且所述发光细菌冻干制剂精密度cv值小于10％，且经复苏后，发光细菌的存活半衰期T_1/2≥6小时。

13.一种试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括容器以及位于所述容器中的权利要求11或12所述的冻干制剂。