[发明专利]一种发光细菌冻干制剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种发光细菌冻干制剂的制备方法，具体地，包括步骤：a.提供一含发光细菌和保护剂的液态混合物；b.将所述的混合物降温至第一温度区间T1并在第一温度区间维持一段时间P1；c.将所述降温后的混合物从第一温度区间T1升温至第二温度区间T2，并在第二温度区间维持一段时间P2；d.将所述的升温后的混合物升温从第二温度区间上升至第三温度区间T3,并维持一段时间P3；和e.将所述的休眠混合物进行干燥，从而形成发光细菌的冻干制剂。本发明方法制备的发光细菌冻干制剂稳定性高，复苏后的活性有效时间长。

技术领域

本发明涉及微生物制剂领域，具体地，涉及发光细菌尤其是青海弧菌(Vibrioqinghaiensis)的冻干制剂领域。

背景技术

利用发光细菌对于毒物的敏感性，进行测试和评价环境或食品的综合急性毒性已成为越来越常用的监测方法。

在利用发光细菌测试毒物毒性的技术测试和评价环境或食品的综合急性毒性过程中，通常使用发光细菌培养液或发光细菌冷冻干燥试剂。

发光细菌的培养液与冷冻干燥试剂相比，培养液使用复杂，需要先将发光细菌进行固体斜面培养基培养，培养过程往往需要反复操作多次，发光细菌培养液稳定性和一致性差，对培养时间和环境以及专业人员要求高。

目前，发光细菌冻干制剂相比培养液而言，虽然具有携带方便、操作简单的优点，但由于复苏后的冻干细菌有效性保持时间较短，仅1小时左右，并不能满足长时间的测试需求。

因此，本领域迫切需要开发一种稳定性高且能在复苏后长时间有效的冻干制剂。

发明内容

本发明提供了一种发光细菌冻干制剂及其制备方法，以及一种包括本发明发光细菌冻干制剂的试剂盒。

本发明的第一方面，提供了发光细菌冻干制剂的制备方法，包括步骤：

a.提供一含发光细菌和保护剂的液态混合物；

b.将所述的混合物降温至第一温度区间T1并在第一温度区间维持一段时间P1，从而形成降温后的混合物，其中所述的第一温度区间T1为-100～-60℃，更佳地为-90～-70℃；P1为0.2～10小时，较佳地，为0.5～8小时，更佳地，为1～4小时；

c.将所述降温后的混合物从第一温度区间T1升温至第二温度区间T2，并在第二温度区间维持一段时间P2，从而形成升温后混合物，所述的第二温度区间T2为-55～-30℃，更佳地为-40～-35℃；P2为0.2～24小时，更佳地，为0.5～10小时；

d.将所述的升温后的混合物升温从第二温度区间上升至第三温度区间T3,并维持一段时间P3，从而形成休眠混合物，所述的第三温度区间T3为-5～0℃，且P3为1～72小时，更佳地，维持5～24小时；和

e.将所述的休眠混合物进行干燥，从而形成发光细菌的冻干制剂。

在另一优选例中，在步骤b中，所述的降温是将0～40℃液态混合物降至第一温度区间T1。

在另一优选例中，在步骤b中，所述的降温速率为1-5℃/min。

在另一优选例中，在步骤b中，所述的降温时间为0.25－2小时。

在另一优选例中，步骤d中还包括步骤：将所述升温后的混合物分阶段升温至所述的第三温度区间T3。

在另一优选例中，所述的分阶段包括分为一阶段、两阶段或三阶段。

在另一优选例中，包括将所述的混合物升温至一个或多个亚温度区间S，所述的亚温度区间选自下组：-25±2℃、-20±2℃、-15±2℃、-10±2℃。

在另一优选例中，在各亚温度区间的维持时间Ps为5～60min，更佳地，为10～30min。