[发明专利]香菇C91-3菌株的Latcripin-4基因片段、编码蛋白及制备方法

权利要求书

1.一种香菇C91-3菌株的Latcripin-4基因片段，其特征在于如SEQ ID NO：1 所示的核苷酸序列。

2.一种如权利要求1所述香菇C91-3菌株的Latcripin-4基因片段编码蛋白，其特征在于如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

3.一种如权利要求1所述香菇C91-3菌株的Latcripin-4基因片段的制备方法，其特征在于依次按如下步骤进行：

a. 提取香菇C91-3菌株的菌丝体总RNA；

b. 将菌丝体总RNA反转录合成cDNA；

c. PCR扩增目标基因：

以所得到的cDNA为模板、以具有BamHⅠ 和 XhoⅠ两个酶切位点的PCR反应引物进行PCR反应；所述PCR反应引物序列如下：

上游引物BamHⅠ：

5'-GGCTGATATCGGATCCACCTCACTTCATGCACACT-3' 

下游引物XhoⅠ：

5'-GGTGGTGGTGCTCGAGCAAACATGCCATCGCACTT-3' 

d. 回收纯化DNA片段：

将所得到的PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，纯化1386bpMarker附近的明

显条带，切胶回收DNA片段。

4.根据权利要求3所述香菇C91-3菌株的Latcripin-4基因片段的制备方法，其特征在于所述a步骤是取培养18天的香菇C91-3菌株的菌丝体，于研钵中加入液氮充分研磨，加入Trizol后室温静置30min，样品融化后继续研磨至裂解液透明状，室温静置5min后，12000r/min离心5min，将上清转移至新的离心管中，然后加入1/5体积氯仿，温和振荡后，4?C, 12000r/min离心，15min；吸取上层水相溶液并转移至另一离心管中，加入等体积异丙醇，混匀后室温静置15min，再次4?C，12000r/min离心，10min，弃上清，然后加入75%乙醇洗涤并干燥，最后用DEPC处理水溶解，得到香菇C91-3菌株的菌丝体总RNA。

5.根据权利要求4所述香菇C91-3菌株的Latcripin-4基因片段的制备方法，，其特征在于所述c步骤的PCR反应体系50 μl： cDNA模板1μl，上游引物0.5μl，下游引物0.5μl，dNTP Mixture  4 μl、5×PrimeSTAR Buffer 10 μl、PrimeSTAR HS DNA Polymerase（2.5 U/μl）0.5 μl、灭菌蒸馏水33.5μl；反应条件：98℃变性10s，55℃复性10s，72℃延伸1min，30个循环；72℃延伸5min；4℃冷却10min。