[发明专利]一种大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭诱导表达体系的构建

权利要求书

1.一种大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭诱导表达体系的构建，其特征在于方法如下：

1）SacR调控序列的制备：提取枯草芽孢杆菌基因组；根据NCBI公布的SacB序列，以提取的枯草芽孢杆菌基因组为模板，设计上下游引物pS1及pS2，在两端分别添加Xba I和Nde I酶切位点，PCR扩增获得SacR调控序列；

所述的上游引物pS1的序列为GCGTGCTCTAGAGATCCTTTTTAACCCATC；

所述的下游引物pS2的序列为GAATTCCATATGCGCAAACGCTTGAGTTG；

2）制备GST标签蛋白序列；

3）获得目的蛋白序列；

4）各元件的连接以及与载体的连接：连接经Quick Cut Nde I内切酶处理的SacR片段与GST片段，得到SG序列，经Quick Cut Vsp I酶切后与同样经Quick Cut Vsp I酶酶切的目的蛋白序列片段进行连接，得到重组序列；将重组序列和提取质粒pHY300-PLK分别经Quick Cut Hind III和Quick Cut Xba I 双酶切后连接，得到重组质粒；

5）重组质粒的转化：将重组质粒转入枯草芽孢杆菌WB600感受态细胞中；

6）目的蛋白在枯草芽孢杆菌WB600中的诱导表达：选取5）步获得的阳性转化子接种于含有Tetracycline的LB液体培养基中，37℃、200rpm活化2h，之后以1%接种量接种于含有Tetracycline的LB液体培养基中，37℃、180rpm震荡3h，12000rpm离心10min后取上清液，上清液中加入20%蔗糖溶液作为诱导剂至终浓度为2%，持续诱导48h，12000rpm离心10min，取上清，得融合多肽。

2.如权利要求1所述的一种大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭诱导表达体系的构建，其特征在于步骤1）中所述的枯草芽孢杆菌基因组是枯草芽孢杆菌WB600基因组。