[发明专利]一种依诺肝素钠中间体酯化率的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种依诺肝素钠中间体酯化率的检测方法。

背景技术

肝素是一种硫酸化的多糖，属于糖胺聚糖家族。肝素通过与其他不同蛋白结合，可以发挥重要的生物活性，从而被作为一种抗凝血的药物被广泛的应用。肝素作为抗凝血药物己有70余年，为心血管外科和血液透析的发展作出了巨大的贡献。到目前为止还没有一种能够完全代替它的产品，所以肝素仍然是最重要的抗凝血和抗血栓的生化药物之一。

但是肝素在长期的使用过程中，会产生许多不可预见的副作用，如剂量个体差异性大、难于确定合适剂量，除小剂量肝素疗法外，给药时间需要进行实验室监测，否则会出现因肝素引发的血小板减少症等问题。为了解决这些不利的因素，人们研制出了新型抗凝血药物“低分子量肝素”。低分子量肝素是未分级肝素中具有较低分子量的组分或片段，具有与未分级肝素相同的母体结构，这类药物具有链短、结合部位少、生物利用度高、半衰期长、个体差异和不确定因素少、剂量易于确定、无需进行血药浓度检测等优点。

依诺肝素钠是全球销售量最好的一种低分子量肝素。依诺肝素钠质量指标中最重要的是平均分子量及分子量其分布，而依诺肝素钠的工艺过程中的中间体肝素酯化率则对其分子质量及其分布起到决定性的作用。依诺肝素钠生产工艺中的肝素钠苄基酯中间体的酯化率是指，在二氯甲烷的溶剂中，肝素苄索氯铵盐与苄氯发生SN₂亲核取代反应，所生成的肝素苄基酯的量的多少。酯化率越高，在之后的碱性水解条件下，裂解后的平均分子量越低，因此只有将酯化率控制在一定的范围内才可以得到符合质量标准要求的依诺肝素钠产品。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种依诺肝素钠中间体酯化率的检测方法，该检测方法能准确、快速、简便的得到肝素钠苄基酯中间体的酯化率。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种依诺肝素钠中间体酯化率的检测方法，包括步骤为：

（1）将肝素苄索氯铵盐与苄氯反应得到的含有肝素苄基酯的混合物在60℃下烘干3小时得到样品，将所述样品与1N氢氧化钠溶液混合水解，再加入冰醋酸调节pH值为6-7，加入水定容得到样品溶液；

（2）用高效液相色谱仪分别对0.5g/L苯甲醇标准溶液和5g/L样品溶液检测得到标准溶液的高效液相色谱图和样品溶液的高效液相色谱图，根据公式W%=(c1*b）/（a*c2）*100%得到肝素苄基酯的酯化率，其中a为标准溶液的高效液相色谱图得到的峰面积，b为样品溶液的高效液相色谱图得到的峰面积，c1为标准溶液的浓度，c2为样品溶液中样品的浓度。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（1）中所述样品、所述氢氧化钠溶液、所述冰醋酸和所述样品溶液的比例为10mg：1ml：0.1ml：2ml，所述水解时间为2小时。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（2）中所述标准溶液进样重复5次，所述样品溶液进样重复2次。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（2）中所述高效液相色谱仪检测的条件为流动相是乙腈、甲醇和水，体积比为3:1:16，流速是1.0ml/min，柱温是30℃，波长是256nm，进样量是20μl。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（2）中所述样品溶液在进样前用滤膜过滤至澄清。

本发明的有益效果是：本发明的依诺肝素钠中间体酯化率的检测方法，该方法采用反向色谱法，肝素苄基酯中间体在氢氧化钠碱性条件下水解得到的苯甲醇用高效液相色谱仪检测含量，运用外标法进行准确计算，得到了酯化率的可靠结果，该方法能准确、快速、简便的得到结果，结果准确度高，降低了产品的不合格率和生产成本，改善了产品的质量状况。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些谱图获得其它类似的谱图，其中：

图1是本发明依诺肝素钠中间体酯化率的检测方法一较佳实施例中标准溶液的高效液相色谱图；

图2是本发明依诺肝素钠中间体酯化率的检测方法一较佳实施例中样品溶液的高效液相色谱图。

具体实施方式