[发明专利]DNA结合蛋白的检测方法

权利要求书

1.一种DNA结合蛋白的检测方法，包括如下步骤：

提供待检测的DNA结合蛋白的样品溶液，在Exo III存在的条件下进行消化反应，反应完全后得到消化液，其中，未被Exo III切割的DNA的反义链作为引物被保留在所述消化液中；

将所述消化液加入到扩增体系中，在聚合酶、内切酶和扩增模板存在的情况下，进行等温扩增反应，反应完全后得到扩增液，其中，所述扩增模板包括n段重复序列以及n-1段依次连接所述重复序列的连接序列，所述引物与所述重复序列特异性结合，所述连接序列包括所述内切酶的酶切位点，n为不小于2的整数，所述引物扩增后得到所述扩增模版的互补序列，所述扩增模版的互补序列被所述内切酶切割形成n段包含所述重复序列的靶DNA；

提供纳米金颗粒溶液，并将所述纳米金颗粒溶液与含有第一检测探针和第二检测探针的溶液混合后进行孵育，孵育完成后得到纳米金检测探针溶液，其中，所述第一检测探针与所述靶DNA特异性互补，所述第二检测探针与所述靶DNA特异性互补；

将所述扩增液和所述纳米金检测探针溶液混合，反应完全后对混合液进行检测，完成所述DNA结合蛋白的检测。

2.根据权利要求1所述的DNA结合蛋白的检测方法，其特征在于，所述提供待检测的DNA结合蛋白的样品溶液的操作为：

将HeLa细胞在含有10%胎牛血清的DMEM中培养，置于加湿处理的含有5%二氧化碳的37℃培养箱中，加入20纳克每毫升TNF-α进行刺激，30分钟后用细胞核提取物试剂盒裂解细胞，收集细胞提取物即为所述待检测的DNA结合蛋白的样品溶液。

3.根据权利要求1所述的DNA结合蛋白的检测方法，其特征在于，所述DNA结合蛋白为NF-κB p50蛋白。

4.根据权利要求1所述的DNA结合蛋白的检测方法，其特征在于，所述聚合酶为KF聚合酶，所述内切酶为Nb.BbvCI内切酶。

5.根据权利要求1所述的DNA结合蛋白的检测方法，其特征在于，n=2。

6.根据权利要求1所述的DNA结合蛋白的检测方法，其特征在于，所述纳米金颗粒溶液通过柠檬酸钠还原氯金酸法制备得到。

7.根据权利要求1所述的DNA结合蛋白的检测方法，其特征在于，对所述混合液进行检测的操作可以为：肉眼直接观察，混合液中的纳米金检测探针发生聚集，颜色由红色变为紫色。

8.根据权利要求1所述的DNA结合蛋白的检测方法，其特征在于，对所述混合液进行检测的操作可以为：采用分光光度计检测混合液，光谱采集范围为410nm～800nm，检测最大吸收峰。

9.根据权利要求1所述的DNA结合蛋白的检测方法，其特征在于，所述作为引物的DNA的反义链的序列为SEQ ID No.1所示的序列。

10.根据权利要求1所述的DNA结合蛋白的检测方法，其特征在于，所述扩增模板的序列为SEQ ID No.2所示的序列；

所述第一检测探针的序列为SEQ ID No.3所示的序列；

所述第二检测探针的序列为SEQ ID No.4所示的序列。