[发明专利]一种氯唑西林分子印迹聚合膜的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于药物测试技术领域，涉及一种用于测试氯唑西林的聚合膜，尤其是一种氯唑西林分子印迹聚合膜。

背景技术

氯唑西林（cloxacillin,CLOX），又名邻氯青霉素，为广谱半合成青霉素，具有耐酸、耐青霉素酶的特点，抗菌机制是抑制细胞壁合成，对革兰阳性球菌和奈瑟菌有抗菌活性。在临床上主要用于治疗产青霉素酶的葡萄球菌引起的各种严重感染，如败血症、骨髓炎、呼吸道感染、心内膜炎及化脓性关节炎等。

但近年来，随着抗生素的广泛应用，氯唑西林因价格低廉、使用方便、抗菌作用强，在水产养殖上被广泛用于治疗鱼、虾和海参等水产品中细菌引起的疾病，所以氯唑西林的不合理使用已成为水产品的食用安全隐患，对渔业生产和生态环境都具有严重的危害。如水产品中氯唑西林药物的残留，可以破坏人体胃肠道菌群平衡和增强细菌耐药性，给人类身体健康带来危害。其中欧洲医药评价署（EMEA）、食品法典委员会（CAC）和我国农业部均已制定了氯唑西林的最大残留限量（MRL），残留标志物是氯唑西林，残留检测的对象是所有食品动物及其产品，MRL分别为300μg/kg（肝脏、肾脏、肌肉、脂肪），30μg/kg（奶）。而目前对氯唑西林生物样品前处理方法主要是柱前衍生化法，将样品制备成易于分析的形式，再进一步采用色谱技术、免疫技术或生物传感技术进行定性和定量分析，但这种方法回收率低，选择性差，内源性物质干扰大，有时甚至出现“假阴性”的情况。因此，建立一种测试费用低、操作简便、灵敏度高的测定方法，对氯唑西林在动物源性食品中的残留具有重要意义。

分子印迹技术(molecularly imprinted technique,MIT)是二十世纪八十年代迅速发展起来的一种化学分析技术,通常被人们描述为创造与识别“分子钥匙”的人工“锁”技术。它可以在聚合物中形成对模板分子具有特异性的结合位点。从应用角度来看，分子印迹聚合物又可分为不同的类型，其中分子印迹聚合物膜（MIM）与通常制备的棒状或球状的分子印迹聚合物（MIP）相比，具有操作简便、耗能少、反应时间短、干净无污染等特点；同生物膜相比，又具有耐恶劣环境、稳定性高、易于处理和应用的优点。同时MIM可克服传统膜选择性差的缺点实现从复杂体系中对目标化合物进行特异性吸附的作用。

目前，氯唑西林分子印迹膜的制备尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的缺点，提供一种氯唑西林分子印迹聚合膜的制备方法。该方法测试费用低、操作简便、灵敏度高。

本发明的目的是通过以下技术方案来解决的：

这种氯唑西林分子印迹聚合膜的制备方法，包括以下步骤：

（1）氯唑西林聚合液的制备

称取氯唑西林并使之溶于致孔剂中，超声，待氯唑西林完全溶解得20-100㎎/ml的氯唑西林有机溶液；

在上述氯唑西林有机溶液中，加入功能单体，其中模板分子与功能单体物质的量比为1:2—1:12；之后涡旋5—20min，使氯唑西林与功能单体充分预聚合；再加入交联剂和引发剂，其中引发剂与功能单体的物质的量比为1:10—1:20；待混合均匀，即得所需氯唑西林聚合液。

（2）氯唑西林分子印迹聚合膜的制备

将上述氯唑西林聚合溶液通氮气5-20min除氧，浸入聚偏氟乙烯膜，再通氮气5-20min除氧后，静置浸泡5—20min；取出完全浸透的聚偏氟乙烯膜置入已被除氧的器皿中，在紫外交联仪下反应3—12h；将反应完全后得到的膜取出，用甲醇和冰醋酸的混合液洗脱至洗脱液检测不出模板分子为止，然后再用50—80%的乙腈水溶液洗至中性，即得氯唑西林分子印迹聚合膜；

进一步，上述步骤（1）中所述致孔剂为二甲基乙酰胺DMAC、N-甲基吡咯烷酮NMP、二甲基甲酰胺DMF、甲醇和二甲基亚砜DMSO的一种或两种以上组合。

进一步，上述步骤（1）中，所述功能单体为α-甲基丙烯酸MAA或4-乙烯基吡啶4-VPY；所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯EDMA和三甲氧基丙烷三甲基丙烯酸酯TRIM的一种或两种的组合；所述引发剂为苯基双（2，4，6-三甲基苯甲酰基）氧化膦TPO和偶氮二异丁腈AIBN的一种或两种的组合。

进一步，将步骤（2）所得的氯唑西林分子印迹膜放在乙腈中保存，使用前在室温条件下自然干燥1—2h即可。

进一步，步骤2）中，所述甲醇和冰醋酸的混合液中，甲醇和冰醋酸的体积比为1：（1-9）。

本发明具有以下有益效果：