[发明专利]一种丙型肝炎病毒的DNA疫苗及其制备方法有效
| 申请号： | 201310417993.8 | 申请日： | 2013-09-13 |
| 公开（公告）号： | CN103435690A | 公开（公告）日： | 2013-12-11 |
| 发明（设计）人： | 章晓联;闵远琴 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C07K14/18 | 分类号： | C07K14/18;C12N15/51;A61K48/00;A61P31/20;C12N15/85;C12N15/66 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 张火春 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 肝炎 病毒 dna 疫苗 及其 制备 方法 | ||
1.一种HCV包膜糖蛋白E2突变体，其特征在于：包膜糖蛋白E2的第2个N-糖基化位点发生突变，即N423RT突变为D423RT。
2.根据权利要求1所述的HCV包膜糖蛋白E2突变体，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.编码权利要求1或2所述的HCV包膜糖蛋白E2突变体的基因，其特征在于：E2基因序列的N-糖基化位点的核苷酸发生了突变。
4.根据权利要求3所述的基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
5.根据权利要求3所述的基因，其特征在于：所述基因的N端引入了菌源性非甲基化CpG序列。
6.根据权利要求5所述的基因，其特征在于：所述的CpG序列为GACGTT。
7.一种产生权利要求1或2所述的的DNA疫苗，其特征在于：包含真核表达载体和权利要求3-6任一项所述的基因。
8.根据权利要求7所述的DNA疫苗，其特征在于：所述的真核表达载体为pCDNA3.1。
9.权利要求7或8所述的DNA疫苗的制备方法，其特征在于包括如下步骤：在HCV E2基因两端引入CpG序列以及酶切位点，将该片段构建到载体上，再用定点突变PCR方法将E2上相应的N-糖基化位点的突变，将突变的片段构建到真核表达载体。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于：使用引物CpG-sE2-F和sE2-R扩增E2基因；使用引物CpG-sE2-f、E2N2-Ur扩增含点突变序列的上游片段，用引物E2N2-Df、sE2-R扩增含点突变序列的下游片段；再使用CpG-sE2-F和sE2-R以上游片段和下游片段为模板扩增得到E2第2个N-糖基化位点突变的片段，将该片段构建到pCDNA3.1上，得到产生如SEQ ID NO.1所示序列的E2突变体的DNA疫苗；其中，所述引物序列如下：
CpG-sE2-f：CGGGATCCGACGTTATGGTAGGGAACTGGGCGAAGG，
sE2-r：GCAAGCTTCTCGGACCTGTCCCTGTCGTC，
E2N2-Df：TTGGCACATCgATCGCACGGCCTTGAAC，
E2N2-Ur：GTTCAAGGCCGTGCGATcGATGTGCCAA。
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