[发明专利]实时荧光PCR检测貉子源性成分的引物探针及方法

权利要求书

1.实时荧光PCR检测貉子源性成分的引物探针，分别为：

上游引物Pl：CTATACCTGGCATCTGGTTCTTACC；

下游引物P2：GTCCCATTTGAGTGGATTAGTAGGA；

带有荧光染料的探针序列为: CAGGGCCATGAACTCCCTCCATCC。

2.根据权利要求1所述的实时荧光PCR检测貉子源性成分的引物探针，其特征在于：所述的荧光染料，5′端为FAM标记，3′eclipse标记。

3.实时荧光PCR检测貉子源性成分的方法，其步骤如下：

a.提取待检样品基因组DNA；

b.以所提取的DNA作为模板,加入权利要求1所述的引物对和荧光染料标记的探针以及酶反应液进行实时荧光PCR反应，记录样品反应的Ct值。

4.根据权利要求3所述的实时荧光PCR检测貉子源性成分的方法，其特征在于：所述的实时荧光PCR反应体系为：

2×Real-time PCR预混液 10μL，

上游引物（10 μmol/L） 1μL，

下游引物(10 μmol/L）   1μL，

探针(10 μmol/L）        1μL，

样品DNA(1～100 ng/μL)  2μL，

ddH₂O                  5μL。

5.根据权利要求4所述的实时荧光PCR检测貉子源性成分的方法，其特征在于：所述的实时荧光PCR反应条件为95℃10min,1个循环；95℃，15s，60℃30s,40个循环。

6.根据权利要求3 、4或5所述的实时荧光PCR检测貉子源性成分的方法，其特征在于：所述的实时荧光PCR方法还设有空白对照、阴性对照、阳性对照，判定标准为:

空白对照:以ddH₂O为模板,按照b和c所述条件,进行实时荧光PCR反应,检测Ct值大于或等于40;

阴性对照:以非貉子源性物种基因组DNA为模板,按照b和c所述条件,进行实时荧光PCR反应,检测Ct值大于或等于40;

阳性对照:以貉子基因组DNA为模板,按照b和c所述条件,进行实时荧光PCR反应,检测Ct值小于或等于34;

待测样品貉子源性基因检测Ct值大于或等于40，阴性对照，阳性对照和空白对照结果正常者,判定该样品未检出貉子源性基因;待测样品貉子源性基因检测Ct值小于或等于36，阴性对照，阳性对照和空白对照结果正常者,判定该样品检出貉子源性基因;待测样品貉子源性基因检测Ct值在36-40之间，重做实时荧光PCR扩增，再次扩增后结果Ct值大于400且阴性对照，阳性对照和空白对照结果正常,判定该样品未检出貉子源性基因;再次扩增后结果Ct值仍小于40且阴性对照，阳性对照和空白对照结果正常,判定该样品检出貉子源性基因。