[发明专利]裂开型核酸适配体探针及其在肿瘤细胞检测、捕获与释放中的应用方法

说明书

技术领域

本发明属于核酸探针技术领域，具体涉及一种裂开型核酸适配体探针的设计及其在肿瘤细胞检测、捕获与释放中的应用方法。

背景技术

灵敏而特异的分子探针设计与构建一直是肿瘤诊断学面临的重要挑战之一。在过去几十年间，以“抗原-抗体”反应为基础的免疫分型技术对肿瘤诊断及治疗相关研究的发展做出了巨大贡献。然而，传统的抗体制备过程主要依赖于动物或细胞，使其在应用时往往表现出筛选周期长、成本高、存在批间差、保存和反应条件适应性差等不足。近年来，作为新型“化学抗体”出现的核酸适配体（aptamer）探针，由于具有一系列蛋白质抗体所不具备的优越特性，在肿瘤医学研究领域受到了重要关注，为肿瘤诊断分型技术的发展带来了新契机。

从本质上来说，核酸适配体是指从人工合成的DNA/RNA文库中筛选得到的能够高亲和性和高特异性地与靶标分子结合的单链寡核苷酸，通过指数富集配体的系统进化（Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX）技术筛选而获得（Tuerk C,Gold L.Systematic evolution of ligands by exponential enrichment:RNA ligands to bacteriophage T4DNA polymerase.Science1990,249,505-510.Ellington AD,Szostak JW.In vitro selection of RNA molecules that bind specific ligands.Nature1990,346,818-822.）。它不仅具有类似抗体对靶标的高亲和力和高特异性结合性能，更在许多方面优于抗体，如：靶标种类丰富、合成方法简单且重复性好、修饰灵活以及便于长期贮存和常温运输等。尤其是近几年以全细胞为靶标并引入对相近细胞系反筛过程的cell-SELEX技术的出现，由于其具有富集快速、操作简便、无需了解复杂靶标的详细信息并可同时筛选一组探针等一系列优点，使得aptamer作为分子识别探针在区分不同肿瘤细胞类型甚至亚型方面的能力得到了极大增强（Shangguan D,Li Y,Tang Z,et al.Aptamers evolved from live cells as effective molecular probes for cancer study.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America2006,103,11838-11843.）。目前，基于cell-SELEX技术已有包括血液瘤和实体瘤在内的多种肿瘤细胞特异性aptamer被筛选出来，并被广泛应用于肿瘤分型、诊断和治疗研究中（Fang X,Tan W.Aptamers generated from cell-SELEX for molecular medicine:a chemical biology approach.Accounts of Chemical Research2010,43,48-57.）。