[发明专利]一种筛选原肌球蛋白相关激酶B抑制剂高通量筛选方法在审
申请号: | 201310421153.9 | 申请日: | 2013-09-12 |
公开(公告)号: | CN104458671A | 公开(公告)日: | 2015-03-25 |
发明(设计)人: | 严明;张陆勇;胡洁;高鹏 | 申请(专利权)人: | 中国药科大学 |
主分类号: | G01N21/64 | 分类号: | G01N21/64 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 211200 江苏省南京市*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 筛选 肌球蛋白 相关 激酶 抑制剂 通量 方法 | ||
1.一种原肌球蛋白相关激酶B抑制剂高通量筛选模型,其特征在于,包括步骤:
(1)激酶抑制剂筛选模型的建立与优化;
(2)阳性药验证模型可靠性;
(3)高通量筛选模型验证。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的激酶为原肌球蛋白相关激酶B。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中进行原肌球蛋白相关激酶B浓度梯度、温孵时间、底物浓度、ATP浓度实验。
4.如权利要求3所述的方法,其特征在于,由步骤(1)可得到最佳反应所需的原肌球蛋白相关激酶B浓度为0.02ng/μl,最佳温孵时间为30min,最佳底物浓度为166.3nM,最佳ATP浓度为6.203μM。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)选用步骤(1)所到的合适浓度的激酶,ATP Km,底物Km;将激酶和底物按1:2体积混合,每孔加入4μl,再按浓度梯度每孔加入4μl阳性药,最后每孔加入2μl ATP开始反应,按优化时间室温孵育;配制SA-XL665和TK-Ab,将SA-XL665和TK Ab按体积比1:1混合,每孔加入10μl终止反应,室温孵育1小时后检测,分析数据得阳性药半数抑制率IC50为1.645nM。
6.权利要求1-5中所述任一方法在筛选原肌球蛋白相关激酶B抑制剂的应用。
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