[发明专利]一种筛选原肌球蛋白相关激酶B抑制剂高通量筛选方法在审
| 申请号： | 201310421153.9 | 申请日： | 2013-09-12 |
| 公开（公告）号： | CN104458671A | 公开（公告）日： | 2015-03-25 |
| 发明（设计）人： | 严明;张陆勇;胡洁;高鹏 | 申请（专利权）人： | 中国药科大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 211200 江苏省南京市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 筛选 肌球蛋白 相关 激酶 抑制剂 通量 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种原肌球蛋白相关激酶B抑制剂高通量筛选模型，其特征在于，包括步骤：
(1)激酶抑制剂筛选模型的建立与优化；
(2)阳性药验证模型可靠性；
(3)高通量筛选模型验证。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的激酶为原肌球蛋白相关激酶B。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中进行原肌球蛋白相关激酶B浓度梯度、温孵时间、底物浓度、ATP浓度实验。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，由步骤(1)可得到最佳反应所需的原肌球蛋白相关激酶B浓度为0.02ng/μl，最佳温孵时间为30min，最佳底物浓度为166.3nM，最佳ATP浓度为6.203μM。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)选用步骤(1)所到的合适浓度的激酶，ATP Km，底物Km；将激酶和底物按1：2体积混合，每孔加入4μl，再按浓度梯度每孔加入4μl阳性药，最后每孔加入2μl ATP开始反应，按优化时间室温孵育；配制SA-XL665和TK-Ab，将SA-XL665和TK Ab按体积比1：1混合，每孔加入10μl终止反应，室温孵育1小时后检测，分析数据得阳性药半数抑制率IC50为1.645nM。
6.权利要求1-5中所述任一方法在筛选原肌球蛋白相关激酶B抑制剂的应用。
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