[发明专利]一种检测人EGFR基因突变的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种检测人EGFR基因突变的试剂盒，其特征在于，包括如下扩增引物和测序引物：

1）扩增引物：

EGFR外显子18F：5′-ATGGTGAGGGCTGAGGTGACCCTTG-3′；

EGFR外显子18R:5′-CCTTATACACCGTGCCGAACGCACC-3′，5′端生物素标记;

EGFR外显子19F：5′-GAGAAAGTTAAAATTCCCGTCGCTATCAA-3′；

EGFR外显子19R:5′-GCAGCTGCCAGACATGAGAAAAG-3′，5′端生物素标记;

EGFR外显子20F：5′-ACCATGCGAAGCCACACTGACGT-3′；

EGFR外显子20R:5′-TTGTCTTTGTGTTCCCGGACATAGTCCA-3′，5′端生物素标记;

EGFR外显子21F：5′-GTGAAAACACCGCAGCATGTCAA-3′，5′端生物素标记；

EGFR外显子21R:5′-CCTCCTTCTGCATGGTATTCTT-3′;

2）测序引物：

EGFR外显子18：5′-ATTCAAAAAGATCAAAGTGCTG-3′；

EGFR外显子19：5′-ATTCCCGTCGCTATCAA-3′；

EGFR外显子20：5′-AGGAAGCCTACGTGATGGC-3′；

EGFR外显子20：5′-CCACCGTGCAGCTCATCA-3′；

EGFR外显子21：5′-TTCTTCTCTTCCGCACCCAG-3′。

2.一种应用如权利要求1所述的试剂盒检测人EGFR基因突变的方法，其特征在于，包括：

1）提取样本DNA；

2)PCR扩增：

配制50μl PCR反应体系，包含：ddH₂O21μl、浓度为10μM的EGFR基因一对引物混合物2μl、2×Taq mix25μl、样本DNA2μl，按照下面的循环参数设置循环仪：95℃5min预变性；然后依次在95℃30s，61℃

30s，72℃30s，35个循环；再在72℃保持10min，最终保持在4℃，得到扩增产物；

其中EGFR基因引物混合物含有正向引物和反向引物各1μl；

3)制备单链DNA模板；

4）利用焦磷酸测序设备对分离的模板进行序列分析。