[发明专利]一种癌胚抗原磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种癌胚抗原磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒，其特征在于，包括癌胚抗原校准品、抗癌胚抗原抗体包被的磁珠、酶标记的单克隆抗体、酶所作用的化学发光底物以及浓缩洗涤液。

2.根据权利要求1所述的癌胚抗原磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒，其特征在于，所述癌胚抗原是重组的癌胚抗原或天然的癌胚抗原。

3.根据权利要求1所述的癌胚抗原磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒，其特征在于，所述癌胚抗原校准品的制备方法包括以下步骤：

（1）制备去激素人血清；

（2）将癌胚抗原用去激素人血清配制成浓度为80ng/mL校准品，并将此校准品用去激素人血清稀释得到浓度分别为40ng/mL、20ng/mL、10ng/mL、5ng/mL的校准品，等量分装成浓度分别为0ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL和80ng/mL的癌胚抗原校准品。

4.根据权利要求1所述的癌胚抗原磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒，其特征在于，所述抗癌胚抗原抗体包被磁微粒的制备方法包括以下步骤：

（1）将磁珠用缓冲液分散；

（2）用缓冲液清洗磁珠后，再用缓冲液重新分散磁珠；

（3）取1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺溶解于步骤（2）所得的磁珠溶液中，搅拌反应后再向反应体系中加入癌胚抗原抗体溶液，搅拌混匀，室温下搅拌过夜；

（4）将磁珠与反应体系分离后，用缓冲液洗涤磁珠再用缓冲液重新分散磁珠；向重新分散后的磁珠溶液中加入封闭液封闭，将磁珠与反应体系分离；用缓冲液清洗磁珠后再用缓冲液分散磁珠，得到所述抗癌胚抗原抗体包被磁微。

5.根据权利要求4所述的癌胚抗原磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒，其特征在于，所述步骤（1）中的磁珠用缓冲液分散，使磁珠的终浓度为60～90mg/mL；所述步骤（2）中用三倍磁珠溶液体积的缓冲液清洗磁珠两次后，再用缓冲液重新分散磁珠，使磁珠的终浓度为12～24mg/mL；所述步骤（4）中将磁珠与反应体系分离后用缓冲液洗涤磁珠两次，再用缓冲液重新分散磁珠，磁珠的终浓度为20～50mg/mL；向重新分散后的磁珠溶液中加入1%BSA封闭液，室温封闭3～6小时，将磁珠与反应体系分离；再用pH7.4的Tris-HCl缓冲液清洗磁珠两次后用pH7.4的Tris-HCl缓冲液分散磁珠，使磁珠的终浓度为5～20mg/mL。

6.按照权利要求4或5所述的癌胚抗原磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠的粒径为0.3～1.0μm，所述磁珠为氧化铁为内核、聚苯乙烯表面包裹带羧基活性基团的聚合物，所述缓冲液为MES缓冲液。

7.根据权利要求1所述的癌胚抗原磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒，其特征在于，所述酶为辣根过氧化物酶，所述酶标记的单克隆抗体的制备方法包括步骤如下：

（1）将辣根过氧化物酶溶解于蒸馏水中；

（2）向所述步骤（1）得到的溶液中加入0.1M NaIO₄溶液，室温下避光搅拌，得到混合溶液；

（3）将所述步骤（2）得到的混合溶液装入透析袋中用醋酸钠缓冲液透析过夜；

（4）向所述步骤（3）得到的透析液中加入碳酸盐缓冲液至pH值为9.0～9.5，加入癌胚抗原单克隆抗体，混匀，室温下避光搅拌反应；

（5）向所述步骤（4）得到的反应产物中加入NaBH₄溶液，混匀，静置反应；

（6）将所述步骤（5）得到的反应产物装入透析袋中于PBS缓冲液中搅拌过夜；

（7）取出透析袋中的液体，在搅拌下逐滴加入等体积的饱和硫酸铵溶液，静置；

（8）将所述步骤（7）得到的溶液离心，弃上清；将沉淀物用半饱和硫酸铵洗涤后，将沉淀物溶于PBS缓冲液中；

（9）将所述步骤（8）得到的溶液装入透析袋中透析去除铵离子后，将溶液离心，去除沉淀，上清液即为酶结合物，加入等体积甘油后混匀分装，冰冻保存。