[发明专利]一种癌胚抗原磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于试剂盒技术领域，特别涉及一种癌胚抗原磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

癌胚抗原（CEA）是在1965年由Gold和Freedman首先从胎儿及结肠癌组织中发现的，是一种分子量为22ku的多糖蛋白复合物，45%为蛋白质。一般情况下，CEA是由胎儿胃肠道上皮组织、胰和肝细胞所合成，通常在妊娠6个月内CEA含量增高，出生后血清中含量已经很低下，健康成年人血清中CEA浓度小于5μIU/mL。

CEA属于非器官特异性肿瘤相关抗原，分泌CEA的肿瘤大多位于空腔脏器，如胃肠道、呼吸道、泌尿道等。正常情况下，CEA经胃肠道代谢，而肿瘤状态时的CEA则进入血和淋巴循环，引起血清CEA异常增高，使上述各种肿瘤患者的血清CEA均有增高。

癌胚抗原（CEA）广泛存在于内胚叶起源的消化系统癌症中，如：胃癌、肝癌、胰腺癌以及大肠癌等癌症中，同时在小细胞肺癌、乳腺癌等癌症中也有明确的升高，因此，检测血清中CEA含量对各种癌症的辅助诊断具有明确的意义。

目前样本中癌胚抗原的检测方法主要包括：酶联免疫法（ELISA）、放射免疫法（RIA）、时间分辨免疫荧光法、胶体金免疫层析法以及化学发光法等多种方法。这些方法的检测试剂盒都有各自的优缺点如：酶联免疫法检测限低，线性范围较宽，但该检测试剂盒操作繁琐，检测时间长，自动化程度低，受人为因素影响较大；放射免疫法也有检测限低的优势，但是由于其检测过程中需要用到放射性标记物，对操作人员的身体健康存在不良影响，同时对环境也有一定程度的污染，该检测方法目前已经逐步被其他的技术所替代；胶体金免疫层析法具有检测迅速，操作方便等优势，利于病人自行对样本进行检测，适用于居家检测，但该检测方法不能定量检测，判读结果有一定的误差；化学发光免疫分析技术是进几年新兴的检测技术，具有操作简便，自动化程度高，检测线性范围宽，检测限低等诸多优良的特性，是未来生化检测领域里面技术发展的大趋势。由于化学发光技术是新兴技术，现有的化学发光检测试剂盒在技术上面存在一些明显的缺陷和不足:该试剂盒在癌胚抗原检测过程中检测的线性范围很窄、准确性很低、重现性较差，从而对其应用以及检测带来不良影响，限制了该技术的推广应用。

发明内容

本发明的目的是为解决上述问题而提供了一种检测过程简单、易于操作、自动化程度高、检测线性范围广、准确性好、重现性好的癌胚抗原磁微粒化学发光检测试剂盒及其检测方法。

本发明所采用的技术方案是：

一种癌胚抗原磁微粒化学发光免疫分析检测试剂盒，包括癌胚抗原校准品、抗癌胚抗原抗体包被的磁珠、酶标记的单克隆抗体、酶所作用的化学发光底物以及浓缩洗涤液。

优选地，所述癌胚抗原是重组的癌胚抗原或天然的癌胚抗原。

进一步地，所述癌胚抗原校准品的制备方法包括以下步骤：

（1）制备去激素人血清；

（2）将癌胚抗原用去激素人血清配制成浓度为80ng/mL校准品，并将此校准品用去激素人血清稀释得到浓度分别为40ng/mL、20ng/mL、10ng/mL、5ng/mL的校准品，等量分装成浓度分别为0ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL和80ng/mL的癌胚抗原校准品。

进一步地，所述抗癌胚抗原抗体包被磁微粒的制备方法包括以下步骤：

（1）磁珠的分散：将磁珠用缓冲液分散；

（2）磁珠的清洗：用缓冲液清洗磁珠后，再用缓冲液重新分散磁珠；

（3）磁珠的活化与连接：取EDC和NHS溶解于步骤（2）所得的磁珠溶液中，搅拌反应后再向反应体系中加入癌胚抗原抗体溶液，搅拌混匀，室温下搅拌过夜；

（4）磁珠的清洗及封闭：将磁珠与反应体系分离后，用缓冲液洗涤磁珠再用缓冲液重新分散磁珠；向重新分散后的磁珠溶液中加入封闭液封闭，将磁珠与反应体系分离；用缓冲液清洗磁珠后再用缓冲液分散磁珠，得到所述抗癌胚抗原抗体包被磁微。